桤叶唐棣组培快繁生产技术分析.doc

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1、学无止境桤叶唐棣组培快繁生产技术分析桤叶唐棣是蔷薇科唐棣属一种落叶小乔木或灌木，原产于北美洲从阿拉斯加中部到科罗拉多的落基山脉地区。其果实为浆果状梨果，含有多种营养成分，可称之为高钙植物。果实可加工或鲜食，主要用于酿酒、食品、药品等。其树型美观大方，花、果颇为俏丽，具有一定的观赏价值，可作为园林绿化树种栽培。研究以桤叶唐棣腋芽为外植体，通过组织培养快繁技术，在较短时间内达到了高效诱导外植体分化增殖和高质量保证幼苗成活的目的，并且保存了母体的全部优良性状，遗传性状稳定。１试验材料与方法１．１无菌体系建立。以７０％乙醇（消毒时间为２０ｓ与３０ｓ）为表面消毒剂，

2、分别加入５％次氯酸钠（灭菌时间为１５ｍｉｎ与３０ｍｉｎ）、１０％次氯酸钠（灭菌时间为１０ｍｉｎ与２０ｍｉｎ）和０．１％升汞（灭菌时间为６ｍｉｎ与１０ｍｉｎ）为浸泡消毒剂，接种１００瓶，共设１２个处理（见表１）。采用ＭＳ培养基为基础培养基，附加少量植物生长调节剂ＩＢＡ、６－ＢＡ，培养条件为蔗糖３％，琼脂０．６５％，温度２２～２５℃，光强２０００ｌｘ，光照１４ｈ／ｄ。定期观察结果。１．２试管苗初代培养。将切取带腋芽的茎段在无菌条件下接种到以ＭＳ为基础培养基，附加０．１～１．０ｍｇ／Ｌ浓度的６－ＢＡ和０．０５ｍｇ／Ｌ浓度的ＩＢＡ的诱导培养基中，重复１００次随机取

3、５０次未污染的茎段，共１０个处理（见表２），培养条件为蔗糖３％，琼脂０．６５％，温度２２～２５℃，光强２０００ｌｘ，光照１４ｈ／ｄ，定期观察腋芽分化状况。１．３试管苗继代培养。选取腋芽培养分化后的试管苗，在无菌环境下接种到以ＭＳ为基础培养基，附加０．２～１．０ｍｇ／Ｌ浓度的６－ＢＡ和０．０５～０．１ｍｇ／Ｌ浓度的ＩＢＡ的继代培养基中。每种培养基设计接种１０瓶，每瓶接种３株试管苗。共１０个处理（见表３），培养条件为蔗糖３％，琼脂０．６５％，温度２２～２５℃3学无止境，光强２０００ｌｘ，光照１４ｈ／ｄ，定期观察腋芽分化状况。１．４试管苗生根培养。选取继代培养中

4、生长健壮芽，在超净台上分离成单芽后，转接到以１／２ＭＳ为基础培养基，附加植物激素ＩＢＡ不同浓度的６种培养基中（见表４）。培养条件为蔗糖２％，琼脂０．６５％，温度２２～２５℃，光强２０００ｌｘ，光照１４ｈ／ｄ。每种培养基接种３０个茎段，定期统计试管苗生根情况。２试验结果与分析２．１无菌系建立中各消毒剂的用量分析。试验结果表明，７０％乙醇处理的时间在２０ｓ即可取得较好效果，时间过长则会出现脱水现象。用５％～１０％次氯酸钠处理２０ｍｉｎ以上才能达到消毒目的，但外植体多数出现褐变现象，而使用０．１％升汞处理桤叶唐棣茎段，只需浸泡６ｍｉｎ就可能达到消毒目的，但为避免

5、升汞的残留对植物组织造成伤害必须用无菌水清洗５～６次，并用无菌滤纸吸干水分。２．２不同处理对试管苗腋芽萌发的影响。研究表明，０．５ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ＋０．０５ｍｇ／ＬＩＢＡ浓度的培养基诱导出的腋芽普遍生长健壮，叶片嫩绿，腋芽萌发数量和萌发率较高，为最适合的初代培养基（见表２）。２．３不同处理对试管苗继代增殖的影响。当培养基为ＭＳ＋０．６ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ＋０．１ｍｇ／ＬＩＢＡ时，每个芽新增芽数为６．５，芽多，叶片大，生长快，能更好的保持芽增殖数量与生长速度之间的平衡化（见表３）。２．４不同处理对试管苗生根的影响当培养基不加激素ＩＢＡ时，桤叶唐棣试管苗也能生根，

6、但生根率较低仅为５５％，生根数量较少且根纤细易断。当ＩＢＡ浓度为０．１ｍｇ／Ｌ时，生根率提高到了９８％，每株生根数达到５．５条，平均根长２．３ｃｍ，所生根较粗坚韧质量好。当ＩＢＡ浓度增大到０．２～０．４ｍｇ／Ｌ时，虽然生根率达到了８０～９５％，但每株生根数下降到２．８～４．２条，根长度１．６～２．０ｃｍ，并且根基部愈伤组织较多。因此，生根培养基中ＩＢＡ较合适的浓度应为０．１ｍｇ／Ｌ（见表４）。３结论桤叶唐棣的外植体先用７０％乙醇处理２０ｓ，再使用０．１％升汞浸泡６ｍｉｎ可取得较好的消毒效果；初代培养中，添加０．５ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ＋０．０５ｍｇ／ＬＩＢＡ的Ｍ

7、Ｓ培养基诱导腋芽萌发效果最好；继代培养中，添加０．６ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ＋０．１ｍｇ／ＬＩＢＡ的ＭＳ培养基能更好的保持了芽增殖与生长之间的平衡；在生根试验中，添加０．１ｍｇ／ＬＩＢＡ的１／２ＭＳ培养基，生根效果最好。3学无止境3