最新16生化药物与基因工程药物分析PPT课件.ppt

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1、16生化药物与基因工程药物分析第一节概述第一节概述第一代生物药物：生物体某些天然活性物质加工制成，例如胎盘制剂第二代：利用生化技术从生物材料中分离、纯化获得的，例如纯化胰岛素第三代：利用生物技术生产的天然生化物质及经过生物工程手段改造的新物质（三）基因工程药物先确定对某种疾病具有预防和治疗作用的蛋白质，然后将控制蛋白质合成过程的基因分离、纯化或进行人工合成，利用重组DNA技术加以改造，最后将该基因放入可以大量生产的受体细胞中不断繁殖或表达，并能进行大规模生产具有预防和治疗这种疾病的蛋白质（四）生物制品应用普通的或以基因工程、细胞工程、蛋白质工程、发酵工程等生物

2、技术获得的微生物、细胞及各种动物或人源组织和体液等生物材料制备，用于人类疾病的预防、治疗和诊断的药品。生物制品的分类预防：菌苗（卡介苗）、疫苗（乙肝疫苗）、类毒素（破伤风类毒素）治疗：特异性治疗用品（狂犬病免疫球蛋白）、非特异性治疗用品（白蛋白）诊断：免疫诊断用品（结核菌素）1.生物体的基本生化成分来自生物体，参与、调控和影响人体代谢和生理功能，在某些疾病治疗时具有针对性强、毒副作用小的特点。部分蛋白质药物，极微量就可产生显著效果。2.分子量大:分子量一般为几千至几十万，结构复杂，甚至不确定，分析和检验困难，常需纯度分析和分子量测定。二、药物治疗控制的特点3.

3、结构难确证：各种技术4.全过程的质量控制：对酸、碱、热、pH等敏感，严格控制实验条件和鉴定质量。基因工程药物比传统工艺生产的药物要求更高。5.生物活性检查多肽、蛋白质类药物，除采用理化检验外，还需采用生物鉴定法证实其生物活性。二、药物治疗控制的特点6.安全性检查热源检查、过敏实验、致突变实验7.效价（含量）测定：理化法：生物药物和基因工程药物效价测定和活性测定：酶类药物二、药物治疗控制的特点第二节质量控制的项目和方法来源和种类性状鉴别检查含量测定一、鉴别试验理化鉴别法：化学鉴别法紫外分光光度法HPLC法生化鉴别法：酶法电泳法样品脱盐后等电点聚焦法测定生

4、物鉴别法：血清学法生物学法（一）理化鉴别法1.化学鉴别法：例：溶菌酶+Cu2+络合显色2.紫外分光光度法最大吸收波长固定不变，紫外光谱图一致溶剂：0.01mol/L盐酸例：三磷酸腺苷二钠浓度：20μg/ml判断：λmax：257±1nm3.HPLC法：利用对照品溶液和供试品溶液色谱图的保留时间和肽图谱的一致性进行鉴别。（二）生化鉴别法1.酶法：例：尿激酶的鉴别---气泡上升法原理：方法：取小试管，加入尿激酶巴比妥溶液、牛纤维蛋白原溶液，再依次加入牛纤维蛋白溶酶原溶液、牛凝血酶溶液，迅速摇匀，立即置37℃±0.5℃恒温水浴保温，记时。反应系统在30～40秒内凝

5、结，凝结块内有气泡生成，15分钟内凝结块溶解，当凝结块溶解时，气泡逐渐上升。以0.9%氯化钠作空白，同法操作，凝结块在2小时内不溶。2.电泳法：带电荷的供试品在惰性支持介质中，与电场的作用下，按各自的速度向其对应的电极方向泳动，使组分分离成狭窄的区带。2.电泳法：以肝素鉴别为例。与国家肝素标准品对照，其移动位置相应。3.样品脱盐后等电点聚焦法测定基因工程药物等电点不一致同一产品，不管有几个等电点，批与批之间必须一致（三）生物鉴别法1.血清学法体外的抗原抗体试验。经典血清学反应：凝集反应、沉淀反应、中和反应和补给结合反应免疫扩散、免疫电泳以及荧光标记、酶标记等高

6、敏感的检测技术2.生物法：利用生物体进行试验来鉴别药物。例：家兔惊厥试验鉴别胰岛素。利用胰岛素的降糖作用。给家兔大剂量注射胰岛素，家兔惊厥，迅速静注50%GS，惊厥停止。一般杂质检查：氯化物、硫酸盐、铵盐、铁盐、重金属、酸度等特殊杂质检查：原料药纯度分析和生产过程中杂质的检查二杂质检查（二）特殊杂质检查1.原料药的纯度分析多糖类纯度分析：低聚糖及可能混入的核酸、蛋白质2.生成过程中杂质的检查有传统生产方法不可能存在的有害杂质，如内毒素、致敏原生化药物和基因药物的含量表示方法：百分含量：适用于结构明确的小分子药物或经水解后变成小分子的药物。生物效价或酶活力单

7、位：适用于酶类、蛋白质类药物。三、含量（效价）测定第三节定量分析方法理化分析法生化测定法生物检定法一、理化分析法（一）化学分析法重量法：根据样品中分离出的单质或化合物的重量测定所含成分的含量。滴定分析法：根据生物制品中某些成分能与标准溶液定量的发生酸碱中和反应、氧化还原反应等特性，通过滴定过程而进行生物制品的含量测定的方法（二）电化学分析法电化学分析法：建立在物质在溶液中的电化学性质基础上的一类仪器分析方法，通常将试液作为化学电池的一个组成部分，根据该电池的某种电参数（如电阻、电导、电位、电流、电量或电流-电压曲线等）与被测物质的浓度之间存在一定的关系而进行

8、测定的方法。（三）光谱法1.比色法供试