最新elisa反应系统固相的抗原或抗体酶结合物（enzyme-conjugate课件ppt.ppt

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1、进入夏天，少不了一个热字当头，电扇空调陆续登场，每逢此时，总会想起那一把蒲扇。蒲扇，是记忆中的农村，夏季经常用的一件物品。　　记忆中的故乡，每逢进入夏天，集市上最常见的便是蒲扇、凉席，不论男女老少，个个手持一把，忽闪忽闪个不停，嘴里叨叨着“怎么这么热”，于是三五成群，聚在大树下，或站着，或随即坐在石头上，手持那把扇子，边唠嗑边乘凉。孩子们却在周围跑跑跳跳，热得满头大汗，不时听到“强子，别跑了，快来我给你扇扇”。孩子们才不听这一套，跑个没完，直到累气喘吁吁，这才一跑一踮地围过了，这时母亲总是，好似生气的样子，边扇边

2、训，“你看热的，跑什么？”此时这把蒲扇，是那么凉快，那么的温馨幸福，有母亲的味道！　　蒲扇是中国传统工艺品，在我国已有三千年多年的历史。取材于棕榈树，制作简单，方便携带，且蒲扇的表面光滑，因而，古人常会在上面作画。古有棕扇、葵扇、蒲扇、蕉扇诸名，实即今日的蒲扇，江浙称之为芭蕉扇。六七十年代，人们最常用的就是这种，似圆非圆，轻巧又便宜的蒲扇。　　蒲扇流传至今，我的记忆中，它跨越了半个世纪，也走过了我们的半个人生的轨迹，携带着特有的念想，一年年，一天天，流向长长的时间隧道，袅ELISA反应系统固相的抗原或抗体酶结合物

3、（enzyme-conjugate）ELISA酶联免疫吸附试验：EnzymeLinkedImmunoSorbentAssay酶标抗体及其应用EE酶标抗体：酶标抗体的应用酶免疫组化技术：定性、定位、定量测定ELISA技术：定量检测酶底物显色测定波长辣根过氧化物酶(HRP)邻苯二胺（OPD）四甲基联苯胺（TMP）邻联苯甲胺氨基水杨酸橘红色黄色兰色棕色492*460**425449碱性磷酸酶(AP)4-硝基酚磷酸盐(PNP)黄色400*终止剂为2mol/LH2SO4**终止剂为2mol/L柠檬酸，不同的底物有不同的终止

4、剂ELISA常用的酶与底物辣根过氧化物酶（HRP）来源：广泛分布于植物中，因辣根中含量最高而得名，由无色酶蛋白和深棕色铁卟啉（辅基）构成的一种糖蛋白。渗透性：HRP分子量较小（40kD），标记物容易穿透入细胞内部。底物：HRP作用的底物为过氧化物，如H2O2。显色剂：凡能在HRP和H2O2存在时被酶催化H2O2反应而和成有色产物的化合物（供氢体）都可以用显色剂。供氢体为邻苯二胺（OPD）OPD氧化后的产物呈橙红色，用酸终止酶反应后，最适吸收波长为492nm；供氢体为四甲基联苯胺（TMB)），TMB经HRP作用后共

5、产物显蓝色，用HCL或H2SO4终止后，由蓝色呈黄色，最适吸收波长为405nm。邻苯二胺(OPD)邻苯二胺(O-phenylenediamine,OPD)，产物橙色，可溶性、敏感性高，最大吸收值为490nm，可用肉眼判别；易被浓酸终止反应，颜色可数小时不变，是ELISA中最常用的一种；但对光敏感，使用时要避光，并发现有致癌作用。四甲基联苯胺（TMB）TMB是一种脂溶性较强的基团，因此容易进入细胞与细胞器中的HRP反应，在HRP活性部位产生粗大的、深兰色沉淀物。酶反应用HCL或H2SO4终止后，TMB产物由蓝色呈黄

6、色，可在比色计中定量，最适吸收波长为450nm。TMB显色液中的A液和B液应在2h内新鲜配制。另外，TMB是一种较强的皮肤刺激剂。碱性磷酸酶（alkalinephosphatase，AP）碱性磷酸酶为小牛肠粘膜和大肠杆菌中提炼出来的一种磷酸酯的水解酶，价格比较昂贵。常用的酶底物有对硝基本磷酸盐（PNP）（显色成桔黄色）等。洗涤液加入各种保护性阻剂来抑制非特异性蛋白的竞争吸附作用，已经证明BSA和Tween-20有良好的封阻作用。BSA0.5%-1%,Tween-200.05%洗涤液中常加入防腐剂，但用HRP时，洗

7、涤液不能加叠氮钠，会抑制酶的活性。ELISA类型直接ELISA间接ELISA夹心ELISA竞争ELISA直接ELISAAgE1被检抗原包被3加底物显色2加酶标抗体间接ELISA双抗体夹心ELISA竞争ELISA-测抗原酶标抗原竞争ELISA-测抗体将抗原吸附在固相载体表面;加入已孵育的抗体与抗原反应液；加入酶标二抗；加底物显色。猪瘟抗体ELISA检测科前动物生物制品责任有限公司产试剂盒原理【原理】用间接ELISA检测猪血清中抗猪瘟病毒抗体。猪瘟抗原包被微孔板加入稀释的对照血清和待检血清，温育，洗涤；若样品中含有抗

8、猪瘟病毒的特异性抗体，则将与检测板上抗原结合，洗涤可除去未结合的抗体和其他成分；加入酶标二抗，与检测板上抗原抗体复合物发生特异性结合，温育洗涤；除去未结合的酶结合物；加TMB底物液，与酶反应形成蓝色产物；加HF溶液终止反应；用酶标仪630nm波长测定各反应孔中的OD值。适用于猪场猪瘟疫苗免疫状况的评价以及感染猪的血清学诊断。【试剂盒主要成分】96孔抗原包被板、阴性对照血清