最新[基础医学]chapt11 抗原抗体反应与非标记免疫分析-药学医学精品资料.ppt

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1、最新[基础医学]chapt11抗原抗体反应与非标记免疫分析-药学医学精品资料第一节抗原抗体反应原理※※（一）抗原抗体反应的机理抗原决定簇和抗体分子超变区之间的结构性互补结合，只能发生在极短距离内1.亲水胶体转化为疏水胶体抗体和大多数抗原同属蛋白质。在通常的血清学反应条件下均带有负电荷，使极化的水分子在其周围形成水化层，成为亲水胶体，因此蛋白质不会自行凝集出现沉淀。当抗原与抗体结合后，表面电荷减少，水化层变薄;而且由于抗原抗体复合物形成后，与水接触的表面积减少，由亲水胶体转化为疏水胶体。此时在电解质(如NaCl，的作用下，使各疏水胶体之间进一步靠拢、沉淀，形成可见的抗原抗体复合物。2.抗

2、原抗体结合力静电引力范德华力氢键疏水键疏水作用力两个疏水基团在水溶液中相互接触时，由于对水分子排斥而趋向聚集的力称为疏水作用力，或称为疏水键。当抗原抗体反应时，抗原决定簇与抗体上的结合点靠近，互相间正、负极性消失，由静电作用形成的亲水层立即失去，从而促进抗原与抗体的相互吸引而结合。疏水作用力在抗原抗体反应中的结合是很重要的。提供的作用力最大，约占总结合力的50%。第一节抗原抗体反应原理※※(二)抗原抗体反应的特点高度特异性特异性越强，亲和力也越高；表面化学基团之间的可逆结合不如共价键稳定，易受温度、酸碱度和离子强度的影响而解离，解离后抗原抗体仍具有原有特性；Ab+AgAb:Ag(二)抗

3、原抗体反应的特点3.适宜的抗原抗体浓度和比例（定比性）决定抗原抗体结合后能否出现肉眼可见的反应；4.抗原抗体反应的2个阶段性第1阶段是抗原抗体特异性结合，可在数秒钟至几分钟内完成；第2阶段是小的抗原抗体复合物靠正负电荷吸引形成较大复合物，所需时间从数分钟至数日不等。(二)抗原抗体反应的特点等价带(三)抗原抗体反应的影响因素抗原和抗体自身的因素可溶抗原沉淀颗粒抗原凝集单价抗原不可见反应粗糙细菌生理盐水自凝抗原抗体反应原理※※2.环境影响因素电解质在中性或弱碱性条件下表面带有较多负电荷盐促进沉淀或凝集物的生成；温度常为37℃，提高反应温度可增加抗原抗体分子碰撞机会56℃变性失活；一般反应1

4、5-40℃；酸碱度pH值6-8当pH值接近等电点时，抗原抗体多带正负电荷相等，由于自身吸引而出现凝集，导致非特异性反应。常用免疫分析技术概述免疫反应的形式均相与非均相反应直接与竞争反应AbAg高亲和力AbAg低亲和力特异性结合力的表示方法亲和力和亲合力低亲合力高亲合力Ag-Ab反应的原理Ab过剩Ag过剩比例适当，交联成网络Ag-Ab反应的可见性：1、抗原结合价必须在2价以上；2、抗体结合价也必须是2价或2价以上；3、抗原抗体能形成复合物但不一定能形成沉淀；4、抗原抗体结合形成大分子凝集物的前提是要求其结合价彼此饱和；5、当抗原大大过量时，只有溶解状态的抗原抗体复合物，而无沉淀出现，在免

5、疫检测中称为前带现象。抗原抗体凝集（沉淀）反应形成的特点第二节免疫凝集反应细菌、细胞等颗粒性Ag或表面包被抗原的颗粒状物质与相应Ab在电解质存在的情况下结合，出现肉眼可见的凝集团现象。一、直接凝集直接凝集反应1:2稀释待测血清1:41:81:16玻片法试管法常用于菌种鉴定或ABO血型鉴定常用于检测抗体的滴度或效价，见于临床诊断伤寒或副伤寒所用的肥达氏反应和诊断布氏菌病所用的瑞特试验。二、间接凝集反应将可溶性Ag/Ab先吸附在某些颗粒载体上，形成致敏颗粒，然后再与相应Ab/Ag进行反应产生凝集，叫间接凝集反应。1.正向间接凝集试验抗原致敏载体如检测IgM2.反向间接凝集试验抗体致敏载体如

6、检测乙肝表面抗原，甲胎蛋白等间接凝集反应3.间接凝集抑制试验抗原致敏载体与抗体为检测试剂4.协同凝集反应协同凝集+YYYYYYYYYYYY病人的RBC体内anti-Rh由于抗体多属于IgG，分子量较小，抗体与红细胞间的结合力不能克服细胞间的排斥力，不出现凝集+YYYYYYYYYYYYYYY体外加入抗人IgG出现凝集现象，叫直接库姆试验三、间接血凝试验红细胞为载体1.红细胞载体的致敏红细胞载体的醛化甲醛、戊二醛、丙酮醛载体的致敏2.间接血凝试验检测细菌、病毒、寄生虫等感染后产生的抗体固相间接血凝自身红细胞凝集一、液相内沉淀反应1.环状沉淀试验2.絮状沉淀试验第三节沉淀反应毒素、组织浸液及

7、血清中的蛋白等可溶性抗原与相应抗体反应后，出现肉眼可见的沉淀物，称为沉淀反应。沉淀反应可在液体中进行，也可在半固体琼脂凝胶中进行。滴定方阵抗体稀释度抗原稀释度1/101/201/401/801/1601/3201/640对照1/5+++++++++++++/--1/10++++++++++++++-1/20++++++++++++++-1/40-+/-+++++++++-1/80----+++-抗原抗体在特殊缓冲液中快速形成抗原抗体复合物，使反