最新乙肝五项、梅毒的检测及应用(精减)教学讲义PPT.ppt

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1、乙肝五项、梅毒的检测及应用(精减)免疫层析快速检测技术历史：放射免疫测定1960酶免疫测定1970荧光免疫测定1980-1990化学发光免疫测定1990膜固相免疫测定1990免疫层析快速检测试剂结构图免疫层析快速检测常用的结合物胶体金乳胶颗粒胶体金也称金溶胶，是由金盐还原形成的金颗粒悬液。由一个基础金核及包围在外的离子层构成。呈球形（小颗粒）或椭圆形（大颗粒）。对电解质敏感，对试验有影响。呈色性：胶体金的光散射性与溶胶颗粒的大小密切相关，一旦颗粒大小发生变化，光散射也随之发生变异，产生肉眼可见的显著的颜色变化。固相膜种类玻璃纤维素膜尼龙膜聚偏氟乙

2、稀膜硝酸纤维素膜固相NC膜固相膜特点多孔性毛细管作用非共价键高度吸附高度敏感性抗原或抗体易于漂洗操作简便免疫层析快速检测技术分类双抗体夹心法测抗原间接法测抗体双抗原夹心法测抗体竞争法测抗体操作步骤试剂盒先恢复室温，从原包装铝箔袋中取出试剂盒，在1小时内尽快地使用。将试剂盒置于干净平坦的台面上，用塑料吸管垂直滴加3滴（100微升）无气泡的血清/血浆于试剂盒的加样孔内。等待紫红色条带的出现，测试结果应在15分钟内读取。20分钟后判断无效。结果判断夹心法结果判断竞争法结果判断质量控制应避免样品溶血。溶血、粘稠及高脂标本可能会导致检测结果不稳定。实验环境

3、应保持一定温度，避风。避免在过高温度下进行实验。试剂从包装中取出后，应尽快进行实验，避免放置于空气中过长时间，导致受潮。试剂若为室温应注意防潮；若低温下保存应平衡至室温方可使用。滴加试剂时，应先摇匀，并弃去1~2滴，垂直滴加。此方法为初筛，因此阳性结果须用其他方法（如EIA）进一步确认。乙肝五项的检测及应用1.乙肝五项的各项简述2.乙肝五项各项的临床意义3.乙肝五项32种可能组合4.乙肝五项检测的影响因素5.乙肝五项检测标准化操作乙肝五项乙肝病毒表面抗原（HBsAg）乙肝病毒表面抗体（抗-HBs）乙肝病毒e抗原（HBeAg）乙肝病毒e抗体（抗-H

4、Be）乙肝病毒核心抗体（抗-HBc）乙肝五项的各项简述1．HBsAg血清中检出HBsAg是乙型肝炎的早期诊断指标之一，出现于患者血清转氨酶(ALT)升高前2—8周，至恢复期HBsAg滴度逐步降低乃至消失，抗HBs出现。有部分患者HBsAg在血清中可持续存在,是因肝细胞仍在不断地复制HBsAg。HBV感染后绝大多数感染者外周血中可出现HBsAg.但有少部分HBV感染者血清HBsAg测定为阴性，如暴发性乙型肝炎。急性重症乙型肝炎，肝细胞中以合成HBcAg为主，很少或不合成HBsAg，从而使外周血中无HBsAg。目前国内最常用的HBsAg免疫测定方法为

5、酶联免疫吸附试验(ELISA)，其次是放射免疫试验(RIA)。2．抗HBs当乙型肝炎病毒侵入人体后，刺激人的免疫系统产生免疫反应，这种特异的免疫球蛋白G，就是表面抗体。它可以和表面抗原特异地结合，然后在体内与人体的其他免疫功能共同作用下，可以把病毒清除掉，保护人体不再受乙肝病毒的感染，故称表面抗体为保护性抗体。一般成人期感染乙型肝炎病毒，可以发生急性乙型肝炎，也可没有症状，绝大多数在3～6个月以后才出现表面抗体。检查出抗-HBs阳性，疾病即已逐渐恢复。血液里表面抗体能维持很长时间，直到老年期抗体水平才有所降低。以HBsAg作为疫苗免疫机体产生的抗

6、HBs，对HBV的感染具有保护性免疫作用。乙肝疫苗接种者，体内血循环中除了抗HBs外，不应出现其它乙肝病毒感染血清免疫学标志物，如抗HBe、抗HBc等。一旦出现除抗HBs以外的标志物，则应视为既往HBV感染。        一般情况下，血清中抗HBs和HBsAg不同时存在，若同时检出，可能为抗HBs产生的早期，或属于不同亚型的HBV感染，或由HBV的S基因变异所致。3．HBeAgHBeAg一般通称e抗原，它来源于乙型肝炎病毒的核心。其在血清中的出现时间稍后于HBsAg，一般血清HBeAg阳性者，HBsAg亦为阳性。有研究表明，当乙肝病毒的前核心

7、区发生点突变时，可使得HBeAg无法表达，表现为血清HBeAg或抗HBe测定持续为阴性，但血清HBsAg或HBVDNA可表现为阳性。HBeAg与病毒Dane颗粒、HBVDNA具有伴随关系，是HBV复制活跃的血清学指标，血清HBeAg阳性说明传染性强。急性乙肝病人血清HBeAg持续阳性3个月以上，则有疾病慢性化倾向。        有时临床实验室可见到HBsAg（－）、抗HBs（+）、HBeAg（+）的模式，则很有可能在病毒编码HBsAg的基因区发生了突变。4．抗HBee抗体是乙型肝炎e抗体的简称（抗-HBe），它是由e抗原刺激人体免疫系统产生出

8、来的特异性抗体，当血清HBeAg转阴后，可出现抗HBe，两者同时阳性较少见。但抗-HBe和抗-HBs不同，e抗体不是保护性抗体，不代表患