最新体内药物分析方法的建立和验证教学讲义PPT.ppt

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1、体内药物分析方法的建立和验证分析方法的设计依据分析方法建立的一般步骤分析方法验证的内容与要求体内药物分析应用示例本章内容提要第四章分析方法的建立与验证8/18/20212体内药物分析第一节分析方法的设计依据建立分析检测方法的主要依据待测药物的理化性质及在生物体内的存在状况分析测定的目的与要求生物样品的类型与预处理方法实验室条件第四章分析方法的建立与验证8/18/20213体内药物分析二、分析测定的目的与要求体内药物分析的目的——影响分析方法的应用药代动力学——研究药物在体内吸收、分布、代谢和排泄过程——血浆浓度随时间的变化过程；代谢途径及代谢产物要求——同时测定

2、原形药物和代谢产物检测——宽线性范围(Cmax～Cmax的1/20)、高灵敏度(10-9g/ml)和高专属性(分离能力)(原形药物及其代谢产物的分离)方法——不必强调方法的简便、快速；——大多采用色谱及其脱线或在线联用技术，如HPLC、LC-MS第四章分析方法的建立与验证第一节分析方法的设计依据8/18/20217体内药物分析二、分析测定的目的与要求临床治疗药物监测有效治疗浓度范围内药物浓度方法——尽量简便、易行；适用于长期、批量样品的测定——大多采用UV、RIA或EIA等中毒患者的临床抢救药物浓度极高方法——不必强调方法的灵敏度，强调方法的特异性和分析速

3、度——大多采用色谱及其联用技术GC、GC-MS、RIA或EIA第四章分析方法的建立与验证第一节分析方法的设计依据8/18/20218体内药物分析三、生物样品的类型与预处理方法生物样品的类型与预处理方法——决定分析方法的应用以血浆或血清为分析样品采用蛋白沉淀-溶剂萃取预处理技术——分析样品较为“干净”，可用HPLC检测用RIA分析——样品的预处理方法可较为粗放——经过简单的蛋白沉淀或不经任何预处理直接测定第四章分析方法的建立与验证第一节分析方法的设计依据8/18/20219体内药物分析四、实验室条件在设计体内药物分析方法时，还应充分考虑到实验室现有的或有可能在其

4、它实验室使用的仪器装备，合理选择可行的分析方法。第四章分析方法的建立与验证第一节分析方法的设计依据8/18/202110体内药物分析第二节分析方法建立的一般步骤一、分析方法的选择二、分析方法的建立(一)检测条件的筛选(二)分离条件的筛选第四章分析方法的建立与验证8/18/202111体内药物分析一、分析方法的选择体内药物分析方法的设计生物样品中的药物浓度——决定分析方法的首要因素生物样品中药物或其特定代谢产物的浓度低、样品量少——难以通过增加取样量提高方法灵敏度——通过选择适当的分析方法适应样品分析需求体内药物分析中常用分析方法——特点见表4-1第四章分析方法的

5、建立与验证第二节分析方法的建立步骤8/18/202112体内药物分析二、分析方法的建立分析方法建立之前查阅文献资料——充分了解药物在体内的动力学过程，使所拟定的分析方法——避免受到代谢产物的干扰适用于实际生物样品测定第四章分析方法的建立与验证第二节分析方法的建立步骤8/18/202113体内药物分析二、分析方法的建立初步拟定分析方法后进行一系列试验工作——选择最佳分析条件同时验证分析方法的可行性——确认是否适用于实际生物样品分析方法的建立和验证过程——是不可截然划分的——为便于讨论而分别叙述分析方法的建立步骤第一步：检测条件的筛选第二步：分离条件的筛选第四章分析方

6、法的建立与验证第二节分析方法的建立步骤8/18/202114体内药物分析(一)检测条件的筛选标准物质——照拟定的分析方法(不包括生物基质的预处理)测定——确定最佳分析检测条件(如色谱条件)和检测灵敏度HPLC——调整检测器(类型、条件)色谱柱(型号、牌号、填料性状与粒经、柱长度)流动相(组分及其配比)及其流速柱温、进样量、内标物质的浓度及其加入量等——使各物质具有足够的方法灵敏度(LOQ)良好的色谱参数(n、R、T)适当的保留时间(tR)第四章分析方法的建立与验证第二节分析方法的建立步骤8/18/202115体内药物分析(二)分离条件的筛选在进行分离条件筛选时，应

7、考察生物基质中的内源性物质及代谢产物对分离与检测的干扰，步骤如下：1．空白溶剂试验——溶剂(方法特异性)2．空白生物基质试验——endogenouscompounds(方法特异性)3．模拟生物样品试验——方法效能指标4．实际生物样品测试——代谢产物(方法特异性)第四章分析方法的建立与验证第二节分析方法的建立步骤8/18/202116体内药物分析1．空白溶剂试验待测药物的非生物基质溶液（通常为水溶液）——采用拟定的分析方法进行衍生化反应、萃取分离等样品预处理（反应试剂、衍生化试剂、萃取溶剂等）——测定响应信号（如HPLC峰面积或峰高）考察目标——方法的特异性——空白

8、值应尽可能