最新枸杞多糖的提取与含量测定课件ppt.ppt

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1、枸杞多糖的提取与含量测定实验目的1、掌握提取多糖的原理和方法；2、掌握多糖的纯化原理及方法；3、掌握多糖含量测定的原理及方法。实验原理多糖的提取方法生物活性多糖主要有真菌多糖、植物多糖、动物多糖等等3大类。多糖的提取首先要根据多糖的存在形式及提取部位，决定在提取之前是否要做预处理。动物多糖和微生物多糖多有脂质包围，一般提取时需要加入丙酮、乙醚、乙醇或是乙酸乙酯的混合液进行回流脱脂，释放多糖。植物多糖提取时应该注意一些含脂较高的根、茎、叶、花、果及种子类，在提取前应先用低极性的有机溶剂对原料进行脱脂预处理，目

2、前多糖的提取方法主要有溶剂提取法、生物提取法、强化提取法等等。实验试剂仪器实验试剂干燥枸杞子、葡萄糖标准溶液、蒽酮、浓硫酸、95%乙醇、无水乙醇、三氯甲烷‐正丁醇（4:1）。实验仪器分析天平、托盘天平、离心机（大）、离心机（小）、水浴锅、电炉、漩涡震荡仪、真空烘箱、分光光度计、800ml烧杯、100ml烧杯、离心管、分液漏斗、50ml容量瓶、玻璃棒、量筒、加盖试管若干。实验内容提取粗略称取20g枸杞于，粉碎后放入800ml烧杯中，加500ml蒸馏水，热水提取2h。过滤，加入1/4体积的三氯甲烷‐正丁醇（4:

3、1），剧烈振摇15min，3000rpm离心25min，弃去中间变性蛋白和氯仿层，留用上清液。上清液于80℃水浴搅拌浓缩至50ml。在搅拌状态，将浓缩液加入3倍体积95%乙醇中，室温静置1h左右，3000rpm离心10min，固形物用95%乙醇洗涤，3000rpm离心10min,然后用无水乙醇洗涤，3000rpm离心10min,真空干燥,得LBP粗品。实验内容标准曲线的绘制取干燥试管6支，按下表数据配置一系列不同浓度的葡萄糖溶液。在620nm波长下以第一管为空白试验，迅速测量吸光值，以葡萄糖含量（mg）为横

4、坐标，吸光度值为纵坐标，绘出标准曲线。实验内容枸杞多糖的含量测定精密称定20mg多糖粗品，溶于50ml蒸馏水中，制成样品液。分别吸取0.5ml，1ml多糖溶液至试管中，加蒸馏水至总体积为1ml。冰浴中冷却，再加入4ml蒽酮试剂，沸水浴中煮沸10min，取出后自来水冷却，620nm比色，其他条件与作标准曲线同。测得吸光度值由标准曲线查出样品液的糖含量。实验数据记录与处理标准曲线的绘制以下表格是不同浓度的标准葡萄糖溶液吸光度的实验数据。即可得到如下标准曲线。实验数据记录与处理实验数据记录与处理枸杞多糖的含量测定

5、根据标准曲线可以查得枸杞多糖样液吸光度的数值。样液1含0.02367mg枸杞多糖，样液2含0.04735mg枸杞多糖。实验数据记录与处理枸杞多糖的含量计算根据已经查得的数值，可以进行一下计算c（样品1）=（0.02367mg/0.5ml）*50ml/21.4mg*100%=11.06%c（样品2）=（0.04735mg/1.0ml）*50ml/21.4mg*100%=11.06%注意事项蒽酮-浓硫酸比色法的注意事项：该法的特点是几乎可以测定所有的碳水化合物，所以蒽酮法测出的碳水化合物的含量，实际上是溶液中可

6、溶性碳水化合物的总量。不同的糖类和蒽酮试剂显色的深度不同，果糖最深，葡萄糖、半乳糖、甘露糖和五碳糖依次降低，因此测定糖的混合物的时候，常常因不同糖类的比例不同造成误差，但是测定单一糖类则可以避免此类误差。在进行枸杞多糖的提取提纯的时候，一定要注意沉淀枸杞多糖所需乙醇的浓度，切不可加入无水乙醇而没有意识到乙醇浓度的降低，引起提取枸杞多糖的量的降低。注意事项■在Sevag法中，可以通过配合蛋白质酶消化法达到更好的提纯效果。在进行枸杞多糖的定量测量的时候，一定要注意葡萄糖标准溶液以及样品的用量，否则会造成较大误差

7、，标准曲线的绘制中要用线性回归进行拟合。在进行620nm波长的吸光度测量时，一定要进行比色池的校准，否则将会带来较大的误差，比色池的校准，直接用标准曲线绘制时第一组试剂进行校准即可，且必须在实验开始前进行校准，及时交换吸光度不同的比色池，用吸光度小的比色池做100%吸光度的校准池。谢谢！所有实验报告内容。wordswordsContentThemostbeautifulwordsLookoppositHomeworkWordsofthewordstrackThemeaningsblockletterandl

8、owercaseAboutcolorsFruitandothers一。themostbeautifulwors1.mothercontent2.smlie3.lovecontent二。VoiceofthewordstackTitfortat：针锋相对Tweedledumandtweedledee：半斤八两humandhaw：表示犹豫或支吾的嗯嗯呃呃声cling-clang：叮当作响，铿锵声。rat-tat,rat