脑梗死患者阿司匹林抵抗和相关基因多态性探究

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1、脑梗死患者阿司匹林抵抗和相关基因多态性探究　　[摘要]目的探讨脑梗死患者阿司匹林抵抗（AR）发生率及环氧化酶-1（COX-1）基因C50T和环氧化酶-2（COX-2）基因G765C多态性与阿司匹林抵抗的相关性?方法634例首次发病的脑梗死患者，入院次日开始服用阿司匹林，服用阿司匹林治疗前和治疗7～10天后分别检测二磷酸腺苷（ADP）和花生四烯酸（AA）诱导的血小板聚集率（PAG），并采用多聚酶链式反应结合限制性内切酶片段长度多态分析方法检测COX-1基因C50T?COX-2基因G765C多态性?结果634例脑梗

2、死患者中，阿司匹林抵抗（AR）者129例（20.35%），阿司匹林半抵抗（ASR）28例（4.42%），阿司匹林敏感（AS）477例（75.23%）?COX-1C50T和COX-2G765C基因型及等位基因在ASR+AR组及AS组的比较差异无统计学意义（P>0.05）；服用阿司匹林后7～10天，脑梗死患者AA诱导的血小板聚集率及ADP诱导的血小板聚集率分别下降80.1000%及40.00%；无论COX-1C50T和COX-2G765C的哪种基因型均可使AA诱导血小板聚集率及ADP诱导血小板聚集率降低，但各种基因

3、型在这些指标降低幅度的比较差异无统计学意义（P>0.05）；COX-1基因C50T和基因GCOX-2765C变异者AA诱导血小板聚集率在服阿司匹林前后均高于无变异者，差异有统计学意义（P　　40%respectively.BothoftheCox-1C50TandCox-2G-765Chadsimilareffectsonplateletaggregation，butthepercentageofreductioninplateletaggregationshadnosignificantdifferences

4、（P>0.05）.TherateofAA-inducedplateletaggregationsamongthevariantsgeneofCox-1C50TandCox-2G765Cweresignificantlyhigherthanthatwithoutvariantsbeforeandafteraspirinintake（P450×109/L或10　　2项标准者称为阿司匹林抵抗（AR），符合其中1项者称为阿司匹林半抵抗（aspirinsemiresponder，ASR），反之为阿司匹林敏感（aspiri

5、nsensitivity，AS）?1.2.2人全血DNA提取：服阿司匹林前用含EDTA的抗凝管取肘前静脉血3ml，AXYGEN公司提供的AxyPrep血基因组DNA提取试剂盒，采用独特的细胞裂解和血红素/蛋白沉淀技术，结合DNA制备膜选择性地吸附DNA的方法提取DNA?PCR扩增：PCR引物：COX-1上游：5′-GGTGCCCGGTGGGGAATTTTC-3′，下游：5′-GAGGGGAAAGGAGGGGGTTG-3′；COX-2上游：5′-CCGCTTCCTTTGTCCATCAG-3′，下游：5′-GGCT

6、GTATATCTGCTCTATATGC-3′；（上海生工生物工程技术服务有限公司合成）?PCR反应体系（50μl反应体系）：PremixExTaqTM12.5μl，ROXReferenceDyeⅡ0.5μl，上下游引物各2μl，模板8μl加双蒸馏水25μl，混匀?PCR扩增条件：预变性94℃5min：94℃45s，55℃45s，72℃45s，共35个循环：最后72℃延伸1010min?扩增产物用2%琼脂糖凝胶电泳，EB染色，紫外灯下观察结果?PCR产物酶切消化：取PCR产物5μl，限制性内切酶SmuI（Ferm

7、entas）1μl（1U），10×BufferlTangoTM1μl，灭菌去离子双蒸水8μl，反应总体积15μl，37℃酶切16h终止酶切反应，反应产物用2%琼脂糖凝胶?100V稳压电泳80min，EB染色，紫外灯下观察结果并照相?并对部分基因位点的PCR片段采用DNA测序仪（ModelABI3730；PEAppliedBiosystems）测序鉴定?1.3统计学处理：应用SPSS13.0版统计软件对数据进行分析?布后采用t检验；计数资料采用卡方检验?血小板聚集率结果一致性判断采用Kappa检验?P0.05），

8、见表1?2.3两组COX-1C50T和COX-2G765C多态性分布比较：COX-1C50T多态性分布，634例患者中597例（94.2%）为纯合CC基因型，37例（5.8%）为杂合CT型，未见纯合TT基因型?COX-2G765C多态性分布，442（69.7%）为纯合GG基因10型，156例（24.6%）为杂合GC型，36例（5.7%）为纯合CC基因型?COX-1C50T和COX-2G