血型检查方法学评价及其质量控制.ppt

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1、血型检查方法学评价及其质量控制血型概述血型是人类血液以血型抗原为表现型的遗传性状，ABO血型系统和Rh血型系统是红细胞的两大血型抗原抗体系统，在临床输血和血液遗传学研究上有重要意义。血型鉴定(bloodtyping)是临床输血的首要问题，正确的血型鉴定是保证输血安全的前提条件。主要内容ABO血型系统ABO血型系统抗原ABO血型系统抗体ABO血型系统亚型ABO血型鉴定检测原理鉴定方法方法学评价质量控制RH血型系统RH血型系统抗原RH血型系统抗体RH血型鉴定检测原理鉴定方法方法学评价质量控制ABO血型系统抗体分为天然抗体和免疫性抗体天然抗体主要为IgM型免疫球蛋白免疫性抗体则来自母婴

2、血型不合的妊娠或血型不合的输血，通常是来自母体的IgG型免疫球蛋白。ABO血型系统抗体两种抗体的比较特性IgM型IgG型分子量（kD）1000160耐热性（70℃）破坏稳定与红细胞结合最适温度（℃）4-2537与红细胞反应介质生理盐水酶处理或清蛋白溶液被血型物质中和能不能通过胎盘不能能ABO血型系统亚型A抗原的主要亚型有A1和A2，均能与抗A血清发生直接凝集反应。AB血型中也存在相应的A1B和A2B亚型。B亚型较少见，且抗原性弱，故临床意义不大。ABO血型检测原理血型抗原与相应抗体在反应介质中形成红细胞和相应血型抗体结合的免疫复合物，出现肉眼可见的凝集现象。正向定型（direct

3、typing）反向定型（indirecttyping）鉴定方法血凝试验玻片法试管法全自动微板法流式细胞技术酶联免疫吸附试验微柱凝胶试验鉴定方法盐水凝集法（saltmediumtest）鉴定方法正定型，玻片法鉴定方法玻片法评价它是目前临床常用的血型鉴定的初筛试验方法。具有操作简便，节省材料的优点。但弱凝集反应需要借助显微镜观察确定。鉴定方法反定型，试管法鉴定方法试管法评价——优点试管法是交叉配血试验中最基础的试验方法之一。与玻片法原理相同，但是借助试管更大的反应空间，并对待测红细胞予以一定的浓度的稀释或者加入更多的待测红细胞，通过低速离心后可根据有无肉眼可见凝集反应来判断结果。由于

4、待测红细胞经过稀释，在一定程度上减少了血液中非特异性抗体的浓度，从而提高了试验的敏感性。比玻片法更具有准确可靠的优点。鉴定方法试管法评价——缺点只能检测出完全抗体（抗A、抗B）引起的血型不合，对免疫性抗体引起的血型不合不能检出，有输血史或不明输血史及妊娠史不能用该法。本实验中的生理盐水对血清（浆）中的抗体有稀释作用，易导致配血结果假阴性。易受冷凝集素的干扰。方法学评价盐水凝集法操作简便，无需特殊仪器。玻片法：无需离心，适用于血型普查。但反应时间长，灵敏度差，凝集较弱时易导致定型错误。不适于反向定型。试管法：用离心法加速反应，所需时间短，适于急诊定型。因离心增强红细胞凝集，可发现较

5、弱的凝集现象，有助于检出亚型，故为常用血型鉴定方法。只能检测完全抗体易受冷凝集素干扰鉴定方法凝胶微柱法鉴定方法凝胶微柱法的结果方法学评价凝胶微柱法重复性好，特异性和灵敏度高，结果准确。试剂成本较高，需用离心设备。根据不同需要可选用中性凝胶、特异凝胶或抗球蛋白凝胶作为反应介质。结果既可肉眼观察，也可用血型分析仪分析。鉴定方法全自动微板法标准化加样、孵育、离心、悬浮、静止反应前后吸光度值增加数值的计算对血型进行正定型与反定型方法学评价全自动微板法此法正反定型试验，准确率高，且能提高检测灵敏度，使弱凝集样本更加易显现。快速、准确、自动化程度高等优点，适合批量操作。血型微量化检测具有节约

6、大量昂贵抗血清、缩短检测时间、操作程序简单等优点，目前在各大采供血机构已得到广泛应用。鉴定方法流式细胞技术稀释：将待测血样的红细胞用生理盐水稀释成百分之五的红细胞悬液。标记：分装各管分别等比加入荧光素标记抗体，避光放置15min待受检红细胞上的血型抗原与相应荧光标记抗体结合后，用生理盐水洗涤离心除去未结合抗体。检测：重悬后立即用流式细胞仪检测与荧光标记抗体结合的红细胞，通过软件分析，从而得到待测样本的红细胞血型。方法学评价流式细胞术在细胞分型方面具有速度快、灵敏度高、特异性好，检测结果准确，重复性好。特别适合应用于ABO血型亚型的快速鉴定。目前有研究指出流式细胞技术亦可通过分离孕

7、妇血液中的胎儿红细胞用于产前非侵入性胎儿血型检测。质量控制1.标准血清要求：新鲜，在有效期内，效价高，凝集力强，严防污染常用的抗血清有：人血清ABO血型抗体：稳定性高，已灭活补体人ABO血型单克隆抗体：稳定性较人血清抗体的稳定性差质量控制2.被检红细胞标本新鲜，严防污染。某些疾病出现假凝集，可加做自身血清和红细胞，自身红细胞和生理盐水对照试验及结合反定型结果进行鉴定。当疑有血浆成分干扰血型鉴定时可用生理盐水反复洗涤红细胞以除干扰。质量控制3.试验器材器材清洁、干燥、标记清楚。用试