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1、文档收集于互联网，已重新整理排版word版本可编借，有帮助欢迎下载支持.A霍SI毒素（CT）ELISA检測试剂盒检渕原理试剂盒釆用双抗体一步夹心法菌联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被人霍81毒素（CT）捕获抗体的包被播孔中，依次加八标本、标准品、HRP标记的检測tntt,经11温育并ifflIK洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物81的催化下转化威蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。頤色的深浅和样品中的人霍乱毒素（CT）呈正相关。用在450nm波长下測定吸光«（OD值），计算样品浓度。样品收集、处理及保存方法1.血清：使用不含热原和内毒素的试管
2、，操作il程中避免任何细胞剌激，收集血液后，3000转离心10分钟将血渭和红细胞迅速小心地分离。2.血浆：EDTA、柠檬酸盐或Bf素杭凝。3000转离心30分鉀取上清。3.细胞上清液:3000转离心10分押去除颗粒和聚合物。4.组织匀浆：將组级加入适量生理盐水捣砕。3000转离心10分外取上清。5.保存：如果样本收集后不及时检測，请按一次用量分装，冻存于-20°C,避免反夏冻融，在室温下解冻并确保祥品均匀地充分解冻。自备物品1.II标仪（450nm）2.高精度加样器及枪头：0.5-1OuL.2-20uL.20-200uL.200-1OOOuL3.37C恒温
3、箱探作注意事顶1.试剂盒保存在2-8°C,使用前室温平饬20分外。JJ、冰箱取岀的浓缩洗涤液会有给晶，这厲于正常现1文档来源为:从网络收集整理.word版本可编辑.文档收集于互联网，已重新整理排版word版本可编借，有帮助欢迎下载支持.象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。1.实验中不用的极条应立HI®El自封袋中，密封（低温干爍）保存。2.预处理后的样本无需稀释，直接取1O
4、JLDn样即可。3.严怡按照说明书中标明的时同、加液量及顺序alia育操作。4.所有液体组分使用前充分摇匀。試剂盒组成96孔配置48孔配置备注fit孔繭标板12孔x8条12Jlx4条无
5、标准品(1000pg/ml)0.5mL0.5mL按说明书进行秸释标准品柿释液6mL3mL按说明书进行秸禅样本柿释液6mL3mL按说明书进liSW检測抗U-HRP6mL3mL无20x洗涤缓冲浪20mL20mL按说明书进liSWKftA6mL3mL无KftB6mL3mL无终止液6mL3mL无封板JR2张2张无说明书1份1悅无自封袋1个1f无注：标准品用标准品釉释浪依次柿释为：1000、500、250、125、62.5、Opg/ml.扶剂的准备20x洗涤缓冲液的稀释:義锚水按1：20MS,JP1fft的20x洗涤缓冲液加19价的蒸福水。洗板方法1.手工洗板：甩尽
6、孔内液体，毎孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内腋体，在吸水奴上拍干，如此洗极5次。2.自动诜扳机：毎孔注人诜液350jjL,浸泡1min,洗极5次。探作步卵1.从室遍平IS20min后的钳箔袋中取岀所需扳条，制余版条用自封袋®«®li
7、4°Co2.设置标准品孔、样本孔和空白孔，牢白孔什么Si不加;标准品孔各加不同浓度的标准晶50pL；1文档来源为:从网络收集整理.word版本可编辑.文档收集于互联网，已重新整理排版word版本可编借，有帮助欢迎下载支持.1.待测样本孔先加待测样本10pL,再加样本櫛释液40pL；2.協后标准品孔和样本孔中（空白孔不HI）
8、加人辣根过氧化物曲（HRP）标记的检测折体50pL,,用封极肢封住反应孔,37C水浴鋸或恒温箱温育60mino3.弃去液体，吸水奴上拍干，毎孔加满洗涤液，静置1min,甩去洗涤液，吸水3（上拍干，如此重夏洗极5次（也可用洗极机洗极）。4.所有孔刑人底物A、B&50pL,37C避光Iff育15mino5.所有孔加人终止«50pL,15min内,在450nm液长处测定各孔的OD值。OP绘制标准曲线:在ExcelI作表中，以标准品浓度作横坐标，对fiODl作纵坐标,绘制出标准品线性回旧曲线，按曲线方程it算各算本浓ISfflo试剂盒性能1.准确性：标准品线性BI
9、I月与预期浓度相关系数R值，大于等干0.9200。2.灵敏度:最低检测浓度小T1.0pg/mlo3.特异性：不与其它可溶性給构类似物交叉反应。4.重复性：极内、板间变异系数均小于15%o5.Cfi：2-8°C,避光肪潮保存。6.有效期：6f月7.检测范围：31.2pg/ml-1000pg/ml免贵声明1.试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或人It实騎，否则所产生的一幼后果，由实验者承担，本公司槪不负责。2.严恪按照说明书操作，不同批号不可交换使用，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。1文档来源为:从网络收集整理.word版本可编辑.
