出口食品中霍乱弧菌检验方法.docx

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1、中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T1022—2001出口食品中霍乱弧菌检验方法Methodforthedeterminationofvibriocholeraeinfoodforexport2W12-30发布200276-01实施雷家篇魄疑蠢鬆曾发布sn/t1022-2001前言本标准足按照GB/T1.1-1993（标准化工作导则第1单元:标准的起草与表述规则第1部分:标准编写的基本虎定》的要求组写的.其中技术路线茅同引用美国食品与药品彎理局（FDA）细歯学分析手册（1995年笫8版）中的方法・本标准的附

2、录A足标准的附录。本标准由国家认证认时监督管理委员会提出并归口.本标准起炖单位；中华人民共和国辽宁岀人境检验检疫局.本标准主要起华人:唐守亭、曹际娟.马勇•本标准首次发布.中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T1022-2001出口食品中霍乱弧菌检验方法Methodforthedeterminatinnnfvihrincholeraeinfoodforexport1范围本标准规定了出口食品中霍乱弧菌的检验方法.本标准适用于出口水产品及其他食品的检喩.2引用标准下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本

3、标准的条文.本床准出版时•所示版本均为有效•所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准眾新版本的可能性。SN0330—1994岀口食品中微生物学检验通则3抽样31抽样数It及抽样方法按SN0330逬行.3-2试样制备从混合样品中取出代表性样品•将可食部分（去除贝壳）充分混匀•用四分法缩分岀不小于500g作为试样，装入灭茵容器内，加封后标明标记.33试样保存冷冻样品于一】8匸保存.冷藏样品于+4C保存.24h内检验•4设备和材料41均质器8000r/min-10000r/min.附500mL均质杯•4-2

4、恒温培养箱：3（TC〜60Co4.3显微镜•4・4试管架•4・5微生物实验室通用玻璃器皿、移液管、培养皿铮.5培养基和试剂5-1碱性蛋白联水（APW）5-2TCBS琼脂5・3三塘铁琼脂（TSI）5-4双極铁琼脂（KIA）5-5BN,琼脂5・6特氨酸葡萄植斜面琼脂（AGS）5.7HuCh-Leikon葡萄斯肉汤（HLGI3）5・8赖氮酸脱股函肉汤（Moeller）5-9MR-VP肉汤2002-06-01实施中华人民共和国国冢质昱监督蛰骏检疫总局200b12-30批准SN/T1022-20015-10ONPG陈水5-1

5、1Andrade氏糖类肉汤5-12氧化醸试剂5-13粘丝试验溶液5-14苹兰氏染色液5-155%红细絕生理盐水5-1650单位多粘菌索B纸片5.1710pg和150pgO/129纸片5-18縊乱弧苗诊断血清（01群及0139群）注，培养基和试剂的配创见附录A（标准的附最）.6检验步骤檢验步驟见图1所示.图1霍乱弧菌检验步驟图5-1增茵SN/T1022-2001称取检样25g,加入装有225mL域性蛋白腺水增菌液（APW）的广口瓶内°固体样品应以均质器8000r/min〜10000r/min打碎，或以剪刀充分剪碎•（

6、36±1）C培养6h〜8h和16h〜24h°如为牡蛎样品，应同样制备另一份检样，匱于APW中,42C培养6h〜8h和16h〜24h。5-2分离以3mm〜5mm接种环取6h〜8h和16h〜24h壊菌培养液的表面生长物一环分别划线接种TCBS琼脂平板至少各一个，于（36土1）'C培养18h〜24h.在TCBS琼脂上，典型的花乱弧函菌落为大的•光汛黄色.稍平•具有不透明中心和半透明的边缘.6-3初步鉴定6・3-1用接种环挑取TCBS琼脂平板上2〜5个可疑菌落，划线于TN琼脂上•（36±】〉匸培养12h〜18h.6.3-2

7、以无菌白色滤纸沾取「2琼脂表面培养物,滴加氧化酶试剂进行舗化的试验。5-3-3以接种环取氣化矚阳性的培养物于0.5%去氣胆酸钠液滴中•进行粘丝试验＞6・3・4以接种计取氧化酶和粘丝试验阳性的培养物•接种TSLKIA和AGS,穿剌底层并划线斜面。6.3.5以接种计取上项相同培养物接种GN。和TiN肉汤.、6・3・6将TSI.K1A.AGSEN。和T,N3肉汤于（36士】）C培养）8h〜24h.霍乱弧苗与相关细菌的鉴别见表1.表1霍乱弧菌与相关细菌在初步鉴定试验中的反应KIATSIAGSTNtn斜面底层料面底层斜面底斥

8、KAA＜K少见）AKa十拟态孤笛KAK（A少见）AKA+旳洛血坯弧苗KAKAKA—+KAAAKA—+创伤弧苗K或AAK（A少见）AKA—喑水气型麗茁K或AAk戒AAKK+•类志贺邻单胞窗K或A人K或AANDND+注：K-械性;A-戢性2-微战性;ND—未鉴定•弧曲属细茵在TSRKIA.AGS中不产换化鱼（H0■也不产气•一些气单枪繭屈菌株可能产气.6・4确认