食品生物技术实验指导

《食品生物技术实验指导》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、食品生物技术实验指导实验一、微生物保藏菌种的活化一.目的要求学习各类菌种的活化方法。二、实验器材：斜面菌种、接种环、酒精灯、三角瓶、试管、脱脂棉、纱布、棒绳、琼脂、高压蒸汽灭菌锅、电炉、锅、蛋白胨、牛肉膏、葡萄糖、氯化钠。三、实验内容斜面冰箱保藏菌种→接种环灼烧无菌→挑取一环菌苔→新鲜配置的斜面培养基→划线→恒温培养→菌苔长丰满后备用。四、思考题1.什么是菌种的活化？2.保藏菌种在使用时为何要活化？实验二、紫外线诱变一.目的要求通过本次实验课，使学生学会单细胞悬浮液的制备方法，掌握紫外线诱变的机理及具体操作。二.实验器材：紫外线诱变箱、斜

2、面菌种、接种环、酒精灯、三角瓶、试管、培养皿、玻璃珠、磁力震荡器、脱脂棉、纱布、棒绳、琼脂、高压蒸汽灭菌锅、电炉、三角瓶、水浴锅、蛋白胨、牛肉膏、葡萄糖、氯化钠。三、实验内容6ml活化28℃2-3天单胞悬液无菌平皿紫外线诱变取诱变液1ml2′无菌水9ml10-110-210-310-410-51mlLl1mlLl1mlLl1mlLl分别加入无菌空平皿倒入培养基迅速摇匀凝固后恒温培养形态变异观察四、思考题1.什么是诱变育种？2.紫外线诱变育种的机理是什么？实验三、PDA培养基的制备一.目的要求学习PDA培养基的配制的方法。二.实验器材：菌种

3、、接种环、酒精灯、三角瓶、试管、脱脂棉、纱布、棒绳、蒸锅、高压蒸汽灭菌锅、电炉、葡萄糖、琼脂、马铃薯。三、实验内容马铃薯去皮→称量20g→切条（或切块）→加1000ml水→煮沸30分钟→双层纱布过滤→取滤液→补足水分→加20g琼脂→加热融化→加20g葡萄糖→pH自然→趁热分装于三角瓶→121℃灭菌30分钟。四、思考题1.PDA培养基属于哪类培养基？2.配培养基时为何最后放入葡萄糖？3.PDA培养基适合培养哪一类细菌？实验四、乳酸菌发酵剂的制备一.目的要求学习乳酸菌发酵剂的制备方法。二.实验器材：菌种、接种环、酒精灯、三角瓶、试管、脱脂棉、

4、纱布、棒绳、琼脂、高压蒸汽灭菌锅、电炉、蛋白胨、酵母膏、葡萄糖、磷酸二氢钾、琼脂。三、实验内容奶管菌种母发酵剂中间发酵剂生产发酵剂纯菌种四、思考题酸凝乳的发酵机理是什么？实验五、.原生质体融合一.目的要求学习原生质体融合的方法二、实验器材：斜面菌种、接种环、酒精灯、三角瓶、培养皿、移液管、试管、容量瓶、离心管、玻璃棒、显微镜、离心机等。缓冲液(1)0.1mol/LpH6.0磷酸缓冲液。(2)高渗缓冲液，于上述缓冲液中加入0.8mol/L甘露醇。(四)原生质体稳定液(SMM)0.5mol/L蔗糖、20mol/LMgC12、0.02mol/L

5、顺丁烯二酸，调pH6.5。(五)促融剂40％聚乙二醇(PEG)的SMM溶液。三、实验内容(一)原生质体的制备1．活化菌体将酿酒酵母菌活化分别转接新鲜斜面。自新鲜斜面分别挑取一环接入装有25mL完全培养基的锥形瓶中，30℃培养16h至对数期。2．离心洗涤、收集细胞分别取5mL上述培养至对数生长期的酵母细胞培养液，3000r/min离心10min，弃上清液，向沉淀的菌体中加入5mL缓冲液，用无菌接种环，搅散菌体，振荡均匀后离心洗涤一次，再用5mL高渗缓冲液离心洗涤一次。将二株菌体分别悬浮于5mL高渗缓冲液中。3.酶解脱壁各取3mL菌液于无菌小

6、试管中，3000r/min离心10min，弃上清液，加入3mL含2.0mg蜗牛酶的高渗缓冲液(此高渗缓冲液含有0.1％EDTA和0.3％SH-OH）于30℃振荡保温，定时取样镜检观察至细胞变成球状原生质体为止，此时原生质体形成。二、原生质体融合1.除酶取两亲本原生质体各1mL，混合于灭菌小试管中，2500r/min离心10min，弃上清液，用高渗缓冲液离心洗涤二次，除酶。2.促融向上述沉淀菌体中加入0.2mLSMM溶液，混合后再加入1.8mL40％PEG，轻轻摇匀，32℃水浴保温2min立即用SMM溶液适当稀释(一般为100、10-1、1

7、0-2)。3．再生取融合后的稀释液各0.1mL，放于冷却至45℃左右的6mL固体再生基本培养基试管中，迅速混匀，倒入带有底层再生培养基的平板上，每个稀释度做两次重复，30℃培养96h，检出融合子。4．融合子的检验用牙签桃取原生质体融合后长出的大菌落点种在基本培养基平板上，生长者为原养型即重组子。传代稳定后转接于固体完全培养基斜面上，而亲本类型在基本培养基上是不生长的。四、思考题1.原生质体融合为何要去除细胞壁？2.去除细胞壁的方法有哪些？附录酵母原生质体融合试验用培养基(包括酵母单倍体原生质体融合及电场诱导酵母原生质体融合）1.完全培养基

8、葡萄糖2g蛋白胨2g酵母膏1g蒸馏水100mLpH7.2100Pa灭菌20min。如需配成固体完全培养基时，则需在上述液体培养基中加入2％琼脂。2.基本培养基(用于单倍体酵母原生质体融合试验)