仪器分析之凝胶成像系统的概述

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1、新疆农业大学仪器分析课程论文题目：凝胶成像分析系统的概述姓名：王彦钦学院：动物科学学院专业：动物遗传育种与繁殖年级：2013级研一学号：13350202922013年12月22日凝胶成像分析系统的概述王彦钦摘要：本文主要介绍了凝胶成像分析系统的应用领域、主要和功能特点及一般成像的步骤，为实践提供参考。关键词：凝胶成像分析系统；功能；特点；结果的处理前言在生物学迅速发展的今天，凝胶电泳作为主要的科研实验手段早已被广泛应用于核酸和蛋白的分离，而电泳图像的获取和相关分析主要依靠凝胶成像系统。凝胶成像系统适用于核酸、蛋白电泳和杂交图像的获取、存储和分析。1概述计算机凝胶成像

2、系统和图象处理软件BioImage2.0结合,应用在分子生物学和生物工程研究中的结果保存和分子量计算,密度定量,密度扫描,PCR定量等数据处理中,并能取代某些专用仪器。在分子学实验室中主要的仪器就是凝胶成像分析系统，主要用于DNA的分析，比较方便、快捷，为试验提供了快捷之路。2应用领域凝胶成像分析系统(成像系统和图像分析软件)主要应用于现代生物医学、医药领域，为科研人员提供了分析凝胶图像及其它生物学条带的途径，可用于拍摄核酸和蛋白电泳、层析、菌落等生物医学图像并进行分析。凝胶成像系统图像分析法是进行DNA定量的一种重要手段。该方法主要根据荧光染料与DNA结合,经过激

3、发后得到荧光信号的强弱与DNA含量有关,含量越高,荧光信号越强,并具有一定的比例关系。荧光信号强弱可以通过凝胶成像系统得到的凝胶图片上的DNA电泳条带的灰度值来表示。3凝胶成像分析系统的一般步骤3.1电泳（以基因组DNA检测为例）3.1.1制胶将凝胶电泳槽洗干净晾干，放入制胶板，在距离底板0.5～1.0mm处放置梳子，以形成加样孔。称取1g琼脂糖，放入锥形瓶中，加入100mL0.5×TBE缓冲液，置微波炉中加热至完全溶解，取出摇匀，得到1%琼脂糖凝胶液。待琼脂糖凝胶液冷却至约（50℃）时立即将琼脂糖溶液倒入槽内。制成厚度在3～5mm之间的凝胶，注意不要形成气泡。如出

4、现气泡，立即用移液器或纸片移出。室温下放置30～45min。待凝胶完全凝固后，小心移去梳子，将凝胶放入电泳槽中。3.1.2加样向电泳槽中加入0.5×TBE缓冲液，使液面高出凝胶表面2～4mm。取DNA样品2.5μL与1.5μL上样缓冲液混合均匀，将混合样品加入凝胶样孔进行检测。记录点样顺序和点样量。3.1.3电泳接通电泳槽与电泳仪的电源(注意正负极，DNA片断从负极向正极移动)。因为DNA的迁移速率与电压成正比，所以采用电压100V，电流50mA，如果接线正确，可观察到阳极和阴极处有气泡产生。电泳20min，停止电泳。小心取出胶块，将凝胶放入含有EB染色液中，染色3

5、0min，用作照像分析。4照像及分析4.1载入样品将电泳处理过的凝胶放在暗箱内的透照台上，关好暗箱门。如胶样品比较大,可以先将透照台拉出,然后放置样品。将TransilluminationsControl透射光源控制区的旋钮转至UVsafety紫外安全模式，打开紫外光源。4.2拍照打开软件，按照以下路径操作：View→Plugins→CohuCameraPlug-in。点击preview，出现样品实时图像的传输框，此时可观察到样品的基本轮廓，按照自上而下的顺序调节镜头对焦—光圈(进光量的多少)至样品最清晰，点击capture拍照。基因组DNA成像如图1，PCR扩增成

6、像如图2。图1图24.3保存文件关闭光源，保存需存档的图像。点击：File→Save，可选择图片的保存格式。5凝胶成像分析系统测试结果的计算机处理5.1Word文档中凝胶电泳板图像的插入在凝胶成像分析系统中,存储到Images中的图像及经过旋转后的图像,都可以通过Word“的插入图片”命令完成:插入→图片→来自文件→选择所要插入的图像所在的路径→按“插入”,即可把凝胶板图像插入到Word文档中(如图3和图4)。在Word文档中就可以由插入的图片格式再根据需要进行缩放、调整亮度、灰度等编辑。5.2Word文档中凝胶电泳板图像识别泳道和斑带后的插入由泳道和斑带已识别后的

7、图像在UVWinlabs软件中存储到Images后,识别标记消失,因此不能用“插入图片”法把它插入到Word文档中。但可利用UVWinlabs软件的报告生成器,首先在UVWinlabs软件中创建一个报告,在此报告中插入被识别后的图像,利用报告生成器的编辑功能,选中图像后按复制命令回到Word文档中。再把光标移到需要插入图像的地方,执行编辑下拉菜单中的粘贴命令即可插入该图像(见图5)。其它象增加漂移线、分子量斑带标记等的图像都可照此插入。图1蛋白质凝胶图像的插入图2图像旋转后的插入图3泳道和斑带识别后的图像的插入6凝胶成像系统具备的功能和特点6.1操作自动化仪器的