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时间：2022-01-09
《实验5 叶绿素a与叶绿素b含量的测定》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、实验六叶绿素含量的测定一、实验目的1、熟悉在未经分离的叶绿体色素溶液中测定叶绿素a、b和类胡萝卜素的方法及计算；2、测定叶绿素含量a与叶绿素b含量的意义。二、实验原理叶绿素提取液中同时含有叶绿素a、叶绿素b和类胡萝卜素，三者的吸收光谱虽有不同，但又存在着明显的重叠，在不分离他们的情况下同时测定叶绿素a、叶绿素b、类胡萝卜素的浓度，可分别测定在663nm、645nm、470nm（分别是叶绿素a、叶绿素b、类胡萝卜素在红光区的吸收峰）的光吸收，然后根据Lambert-Beer定律，计算出提取液中叶绿素a、叶绿素b
2、、和类胡萝卜素的浓度。Ca=12.21A663-2.81A645（1）Cb=20.13A645-5.03A663（2）CT=Ca+Cb=8.05A663+20.29A645（3）Cx.c=(1000D470-3.27Ca-104Cb)/229（4）Ca——叶绿素a的浓度（单位为mg/L）Cb——叶绿素b浓度（单位为mg/L）CT——叶绿素的总浓度（单位为mg/L）Cx.c——类胡萝卜素浓度（单位为mg/L）82.04和9.27——叶绿素a和叶绿素b在663nm下的比吸收系数16.75和45.60——叶绿素a和
3、叶绿素b在645nm下的比吸收系数三、实验器料1、材料：菠菜或其它绿色植物叶片2、试剂：80%丙酮或96%乙醇；石英砂；CaCO3；3、仪器：分光光度计（分光光度计的使用）、高速离心机四、实验步骤1、提取叶绿素选取有代表性的植物叶片，称取0.2g剪碎后置于研钵中，加入5ml80%丙酮，少许CaCO3和石英砂。充分研磨（组织变白），再加10ml80%丙酮，静止3-5分钟，冲洗研钵后转至离心管，定容至15ml,3000转、15分钟，取上清液用80%丙酮定容至25ml。测定OD值：取上清液1ml，加80%丙酮4ml
4、，以80%丙酮作空白对照，用分光光度计分别测定叶绿素提取液在645nm、663nm、470nm下的吸光度。3.计算：把测出的吸光值带入(1)(2)(3)(4)式计算叶绿素a、b、a+b和类胡萝卜素的浓度。根据下式求出植物组织中叶绿素的含量：叶绿素的含量（mg/g)=c×v×n/mC—叶绿素的浓度（mg/L)；v—提取液体积(ml)；n—稀释倍数；m—样品鲜重（g)作业：比较阳生植物和阴生植物的叶绿素有何不同？下周实验：植株磷素的测定(钼蓝法)
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