色谱+仪器分析简介

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1、1、简述光电二极管阵列检测器在高效液相色谱中的应用1）色谱峰的纯度检查2）色谱峰的鉴定3）谱带宽度检测4）峰抑制5）选择最佳波长2、简述如何采用二极管阵列检测器检查色谱峰的纯度1）比较光谱法：对于纯物质峰来说，在色谱峰范围内任何洗脱时间处所取的光谱图应该是一直的，对于非纯物质峰来说，在色谱峰的不同部位得到的吸收光谱中，吸收最大值发生了位移。2）吸收比法：对于纯物质，两个特定波长处的吸收比为常数，与浓度无关3）双波长法：记录被测组分在两个等吸收波长处的吸收值差对时间色谱法，纯物质峰应该得到一个零信号，否则证明峰有杂志存在。3、试述影响色谱

2、峰展宽的柱内柱外因素答：柱内因素速率理论1）涡流扩散项和填料的均匀程度有关填充颗粒越小，越均匀峰展宽越小。2）纵向扩散项试样分子在色谱柱内被流动相带向前时，由分子本身运动引起的扩散会引起峰展宽。流速下降，纵向扩散项增加，理论塔板高度增加，峰展宽。3）传质阻力项流速越快阻力越大峰展宽。柱外因素1）尽量减少连线管线的长度，并采用细内径的管线为连接线。2）采用死体积小的检测器。3）避免溶剂效应。进样时，使溶解待测物的溶剂为流动相或洗脱能力比流动相小的弱溶剂。4）采用合适的进样方式和技术进样体积越大，柱外效应越大。4、试述制备气相色谱法填充柱的

3、一般流程和注意事项1）固定液的涂布：要选择合适的溶剂，选择固定液与担体的配比，选择担体的粒度越细柱效越高2）柱管预处理：不锈钢管耐用，但不适用对金属离子不稳定药物的分析，玻璃管易碎，但无金属离子的催化活性3）色谱柱填充及老化：一般多用抽气减压法填充色谱柱，新充好的色谱柱需老化后才能使用5、何谓衍生化技术？其在气象色谱分析中有何应用特点以及三种常见衍生化反应？定义：衍生化技术是药物分析中常用的一种分析手段，是将药物先进行结构改造，再进行色谱分析的方法，称之为衍生化技术。目的（应用特点）：1）使原来不挥发或挥发差的被测组分转变成具有一定挥发

4、性的化合物，降低沸点以适应气相色谱分离的要求2）降低被测组分的极性，减小或消除拖尾和吸附现象3）改变样品中被测组分或干扰组分的理化性质，以改进分离特性4）产生特殊性质，使待测组分在特定检测器上具备或提高检测特性，以达到痕量分析的目的。5）在与其他一起连用技术中，利用各类衍生化反应能获得更明确或特定的结构信息。常用反应种类：1）硅烷化反应2）酯化反应3）酰化反应4）卤代衍生化法6、试述气相色谱仪使用时的一般流程及注意事项流程：1）打开气相色谱仪电源开关，待自检完毕显示正常后，打开气相色谱工作站2）打开载气的气源阀门，控制载气流速3）在工作

5、站或仪器中输入分析参数4）检查参数无误后，运行仪器5）各项参数达到预设值后，分析样品6）实验结束后，先关加热装置，降温后关载气7）最后关闭仪器电源，工作站注意事项：1）开机前检查是否漏气2）用微量注射器取试样要洗涤，如有气泡则针头朝上排气泡3）关闭气源时，先关减压阀，后关钢瓶阀门4）开启热导检测器前必须通载气，试验结束先关电源后关载气5）保持每次进样的平行性6）进样前，通载气再升温，结束后，降温后再关载气7）通常柱温比固定液最高稳定低30°，检测器温度至少比柱温高30°，气化室温度通常与检测器温度相同。HPLC仪的基本操作步骤：1）操作

6、前的准备工作2）开启稳压电源后，依次打开输液泵、柱温箱、检测器和色谱处理机电源3）在输液泵及检测器上设定所需要的流速、检测波长等参数4）排除管路气泡或冲洗管路5）按pump键，设定输液泵以低流速泵出流动相6）待检测器预热后，打开色谱工作站，开始走基线。基线平稳后进样。7）进样，同时采集数据并记录8）试验后关闭电源，卸下色谱柱。7、色谱法的系统适用性试验通常要考察哪些因素，这些因素应如何评价或计算，标准如何？1）色谱柱的理论塔板数：在选定的条件下，用对照品或内标计算色谱柱的理论塔板数n。若达不到规定的理论塔板数，应改变色谱柱的某些条件，是

7、理论塔板数达到要求。2）分离度：定量分析时，为便于准确测量，要求定量峰与其他峰或内标峰之间有较好的分离度。规定，R应大于1.53）拖尾因子：为保证测量精度，特别当采用峰高法测量时，应检查待测物峰的拖尾因子（T）是否符合该品种项下的规定，或不同浓度进样的校正因子误差是否符合要求。T应在0.95-1.054）重复性：取各种项下的对照品溶液，连续进样5次，其峰面积测量值的相对标准偏差应不大于2.0%8、简述反相离子对色谱的分离原理，并对影响溶质保留值的各个因素加以讨论？离子对色谱法：是用正相或反相色谱柱分离离子型化合物和可解离化合物的方法。原

8、理：反相离子对色谱法是把离子对试剂加到极性流动相中，被分析的样品离子在流动相中与离子对试剂生成不带电荷的中性离子对，从而增加了样品离子在非极性固定相中的溶解度，使分配系数增加，改善分离效果。影响因素：1）流