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1、--介导性shRNA能抑制肺癌细胞中livin沉默基因的表达从而促进SGC-7901细胞凋亡背景—由于肿瘤细胞抑制凋亡增殖,特定凋亡的抑制因素会对于开展新的治疗策略提供一个合理途径。Livin是一种凋亡抑制蛋白家族成员，在多种恶性肿瘤的表达中具有意义。但是,在有关胃癌方面没有可利用的数据。在本研究中,我们发现livin基因在人类胃癌中的表达并调查了介导的shRNA能抑制肺癌细胞中livin沉默基因的表达，从而促进SGC-7901细胞凋亡。方法—mRNA及蛋白质livin基因的表达用逆转录聚合酶链反响技术及西方吸干化验进展了分析。小干扰RNA真核表达载体具体到livin
2、基因采用基因重组、测序核酸。然后用Lipofectamin2000转染进入SGC-7901细胞。逆转录聚合酶链反响技术和西方吸干化验用来验证的livin基因在SGC-7901细胞中使沉默基因生效。所得到的稳定的复制品用G418来筛选。细胞凋亡用应用流式细胞仪(FCM)来评估。细胞生长状态和5-FU的50%抑制浓度(IC50)和顺铂都由MTT比色法来决定。结果—livinmRNA和蛋白质的表达检测40例中有19例(47.5%)有胃癌和SGC-7901细胞。没有livin基因表达的是在肿瘤邻近组织和良性胃溃疡病灶。相关发现在livin基因的表达和肿瘤的微小分化和淋巴结转移
3、一样(P <0.05)。4个小干扰RNA真核表达矢量具体到基因重组的livin基因建立。其中之一,能有效地减少livin基因的表达,抑制基因不少于70%(P <0.01)。重组的质粒被提取和转染到胃癌细胞。G418筛选所得到的稳定的复制品被放大讲究。当livin基因沉默,胃癌细胞的生殖活动明显低于对照组(P <0.05)。研究还说明,IC50上的5-Fu和顺铂在胃癌细胞的治疗上是通过shRNA减少以及刺激这些细胞(5-Fuproapoptotic和顺铂)(P <0.01)。结论—livin基因在胃癌中的过分表达与肿瘤分化与淋巴结转移建立联系,建议了治疗胃癌病例分子预后
4、因素之一。ShRNA可以抑制在SGC-7901细胞中的livin基因表达,诱导细胞凋亡。Livin可以作为治疗胃癌凋亡的新目标。1．介绍胃癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一。大多数患者被诊断为这个疾病的阶段,在最正确时间的时机错失了手术治愈。尽管有很大改善,但处于晚期胃癌的化疗患者的总体存活率仍然很低。癌症细胞化疗耐抗性可能导致手术失败。在耐药的原因中,抑制细胞凋亡的过程会起重要作用。癌细胞常有抗凋亡增长的特征[1],介导其增加的阻力不同来刺激的细胞凋亡,如DNA损伤、缺氧、营养损失[2、3]。此外,-.word.zl---在临床实践中细胞凋亡抵抗被认为是肿瘤手术失败的主
5、要原因,因此许多化疗药物和/或放射线疗法都是通过诱导凋亡肿瘤死亡实现的[4]。酶抑制剂(IAPs),是一种新型的凋亡蛋白抑制基因家族[5,6],包括病毒感染,化疗药物,,生长因子和肿瘤坏死因子-α(TNF-α凋亡信号通路)/Fas信号通路[7-9]。IAPs是由一组有凋亡特性的构造相关的蛋白质构成[10]，在预防肿瘤细胞凋亡方面可能扮演一个重要的角色,并已成为近年来研究的热点。这个家庭的新成员是ML-IAP/livin/KIAP/BIRC7(以下称为livin)有两个种类、livinα和livinβ[11-14]。有证据说明,livin的过分表达能阻止由多种刺激诱导的
6、细胞凋亡[12]。有趣的是,livin基因被发现在肿瘤细胞中限制性表达,但是不存在或是很少数量存在于正常成人体组织中[11-15],并且通过允许恶性细胞,以防止凋亡细胞死亡的方式导致肿瘤形成,。所以抑制livin基因表达可能会呈现出一个有趣的治疗策略。在目前的研究中,我们调查了livin的表达在胃cancinomas及其邻近组织。livin的表达和临床病理参数之间的关系进展了分析。此外,我们探索了在抑制livin基因表达的shRNA可行性和胃癌易感性的凋亡细胞由shRNA介导的livin沉默基因。2患者和方法2.1患者和肿瘤样本胃癌中四十个病例及承受胃切除手术的患者收
7、集到的胃癌组织中13个病例(患者年龄从29~77岁)。其中良性胃溃疡的13个病例(慢性浅表胃炎)患者在承受了胃视镜检查(患者年龄从33~77岁)。这些病例均来自医科大学第一附属医院。胃癌患者被诊断为TNM级的1~4阶段(UICC，2002)。手术之后肿瘤标本就立即被冻结在液态氮中,储存在-80℃直到使用为止。这是在所有的病人知情同意的情况下获得的。2.2逆转录聚合酶链反响技术程序总共RNA(2毫克)提取冷冻组织反转录进展，最后的体积2微升是用100pmolofoligo(dT)15和200UM-MLV与逆转录酶(promega、美国),根据制造商的说
