石蜡切片制作流程

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1、石蜡切片制作流程对石蜡切片制作有好处。石蜡切片制作流程表一.取材1，样品要求：长，宽各1cm左右，厚不超过5mm2，固定液：10%福尔马林固定液或4%多聚甲醛：组织块=20:1为宜3，固定时间：依大小而定，一般3-5h即可，如24h或更长，应密封瓶口，封前换液4,修块二.脱水1，水洗：将固定组织块放入广口瓶，瓶口用纱布包好，置流水下水洗，水洗时间依固定时间而定，一般12h以上，固定时间越长水洗时间越长。2，脱水1）75%酒精1h2)80%酒精1h3）95%酒精Ⅰ1h4)95%酒精Ⅱ1h5)100%酒精Ⅰ1h6)100%酒精Ⅱ1h组织块在

2、进入下一阶段梯度酒精前要用吸水纸吸干水，尤其在95%酒精（Ⅱ）中进入100%酒精（Ⅰ）中，切记防止带入水分，全部过程要在瓶口加盖，防止水分进入。三．透亮1)酒精（100%）：二甲苯=1：110min2)二甲苯Ⅰ透亮10min3二甲苯Ⅱ10min四．浸蜡1）二甲苯：石蜡=1：130min温箱56—58℃2）石蜡Ⅰ1h温箱56—58℃3)石蜡Ⅱ1h温箱56—58℃4)石蜡Ⅲ1h温箱56—58℃温度保持在56—58℃，温度太高会烧坏组织块，太低石蜡会凝固。五．包埋首先在金属框架上涂抹凡士林，以保证石蜡到入后不会外溢。将包埋用石蜡及浸蜡组织块放

3、在有石棉网的电炉上保温。在框架中先倒入少许包埋用石蜡，再用镊子将组织块快速移入框架，再倒入石蜡，待完全凝固后取出待用。六．切片和烘片（烘片温度38℃）七．附贴（45℃）；烤片（一）附贴（45℃）附贴液的配制：新奇蛋白20ml,麝香草酚少许，用玻璃棒混匀，再加入甘油20ml,连续混匀。若有多聚懒氨酸处理的切片则挺直用之。（二）烤片：温箱内的温度应保持在40-45℃之间，烤片时间至少1小时。对石蜡切片制作有好处。八．H．E染色（一）脱蜡1二甲苯Ⅰ（脱蜡）10min2二甲苯Ⅱ（脱蜡）10min3100%酒精Ⅰ（脱二甲苯）10min4100%酒

4、精Ⅱ（脱二甲苯）10min595%酒精Ⅰ（脱二甲苯）5min695%酒精Ⅱ（脱二甲苯）5min780%酒精（脱二甲苯）5min8自来水或蒸馏水洗（去酒精）5min（二）染色1苏木素染液6min2冲洗清水（兰化）15min3酸水分化视状况而定10-20S4冲洗淡蓝色即可20min5伊红染液视状况而定6min（三）脱水，透亮1380%酒精颜色淡化1495%酒精Ⅰ5min1595%酒精Ⅱ5min16100%酒精Ⅰ5min17100%酒精Ⅱ10min18二甲苯Ⅰ（透亮）5min19二甲苯Ⅱ（透亮）10min九．封片：用中性树胶将切片标本封固。