中科大FPLC使用参考

《中科大FPLC使用参考》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、..-1.2FPLC使用指南From:USTC 

2、 Date:2016-12-01简介〔INTRODUCTION〕FPLC全称为快速蛋白液相色谱〔Fastproteinliquidchromatography〕，其原理与高效液相色谱理论类似，是由经典的液体柱层析引入气相色谱理论，并且对相体进展了改革，配用高压输液泵，采用高灵敏检测器、梯度洗脱装置、自动收集装置和微机等开展起来的现代液相色谱。我们实验室有两套纯化仪，一台是AKTAprimeplus〔着重介绍〕，另外一台是AKTApureprotein(简单介绍〕。AKTAPure纯化系统〔详

3、见AKTAPureonsite-training〕AKTAPrimePlus纯化系统Ø 平安 (Safety)Ø 组件 (ponents)Ø 方法编程 (Methodprogramming)Ø 使用方法 (Usage)Ø 维护考前须知 (Maintenance)平安(Safety)1. 警告！系统必须与接地电源插座连接。2. 警告！用户不能翻开系统，因为系统含高压电路，会造成致命的电击。..word.zl-..-3. 警告！必须总有上样环连接在上样阀的接口2和6。这是为了在转换此阀时防止液体从这些接口喷出。尤其是使用危险化学品时，这是特别危

4、险的。4. 警告！如果有大量溢出的液体渗入系统外壳并同带电部件接触的危险，应立即关闭系统并同指定的技术效劳人员联系。5. 警告！NaOH有害安康，应防止泄漏。Ø 组件〔ponents〕AKTAprimeplus蛋白质纯化系统包括以下部件： 1. 缓冲液阀和梯度转换阀 (Buffervalveandgradientswitchvalve)：缓冲液阀用于选择使用缓冲溶液，用于系统泵施加大的样品体积。梯度转换阀用于建立梯度。..word.zl-..-2. 系统泵 (Systempump)：系统泵用于经系统运送液体，如样品或缓冲溶液。将液体经缓冲液

5、阀、梯度转换阀或经上样阀进入流动通道。3. 压力传感器 (Pressuresensor)：压力传感器可以测量在位液体压力。还可用作压力保护装置。4. 混合器 (Mixer)：混合器用于混合两元梯度。以两步将溶液混合以得到最适宜的结果。混合器的体积可以选择。5. 上样阀 (Injectionvalve)：上样阀用于装加样环和用于将样品注射到柱上。6. 检测器 (Monitor)：检测器的目的是测量流出柱后液体的UV吸收、电导率和pH〔任选〕。用于这些测量的流动池安装在系统的右侧。7. 具有分流阀的分部收集器 (Fractioncollecto

6、rwithflowdiversionvalve)：分部收集器用于将样品组分收集在管中供进一步分析。分流阀在废液和收集管之间转换流向。Ø 方法编程〔Methodprogramming)主菜单概要Template该菜单出现在自检后启动时，用于运行予制的应用模板和法模板。Run stored Method用于运行用户编辑的运行方法Manual Run用于不使用方法,手工运行系统。Program Method用于编辑用户专用方法。Set Parameters用于对检测紫外 (UV)、电导、pH、温度、和运转泵及混合器设置参数。..word.zl-.

7、.-Check用于检测系统部参数，例如序列号、泵运行时间、和 灯亮度。Ø  使用方法〔Usage)利用AKTAPrimePlus 洗脱镍柱中的蛋白〔以5mL镍柱为例〕1. 翻开AKTA 〔机器背部左下角〕，将A泵和B泵用蒸馏水冲洗干净分别插入到Ni-bindingbuffer和Elutionbuffer中，并在Template中选择systemwash，洗泵(大概五分钟〕。2. systemwash完毕后，先选择manualrun，%B=0，pressurelimitation=0.4MPa，流速=1ml/min。先将Ni..word.zl

8、-..-柱底部接到探测器上，再将1号接线口接到镍柱上端〔这样可以防止绿色线管扭曲〕，观察电脑屏幕待UV线、电导线平齐时Endprogram。3. 设定程序：流速3ml/min，limitpressure为0.4MPa设定breakpoint：0ml：%B=4，setfractionsize=020ml：开场拉梯度，%B=4；开场收集样品，setfractionsize3ml/tube80ml：%B=60；同时也一直在收集样品，setfractionsize 3ml/tube100ml：%B=60〔有时有些蛋白量很大或者延时出来，可以设这个程

9、序，以防万一〕，setfractionsize3ml/tubeEnd4. 蛋白纯化完毕后，要清洗AKTA泵部溶液，方便下位同学使用，将A泵和B泵用蒸馏水冲洗干净插入到蒸馏水中，并