SZDBZ 129-2015 蓝舌病病毒抗体检测 竞争酶联免疫吸附法

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1、ICS11.220B41SZDB/Z深圳市标准化指导性技术文件准SZDB/Z129—2015蓝舌病病毒抗体检测竞争酶联免疫吸附法DetectionofantibodyagainstBluetonguevirusCompetitiveimmunoenzymaticassay2015-02-27发布2015-03-01实施深圳市市场监督管理局发布1SZDB/Z129—2015目次前言...............................................................................

2、...Ⅱ1范围...............................................................................12规范性引用文件...................................................................13检测原理.....................................................................14缩略语............................

3、.........................................15试剂和材料.......................................................................26主要器械和设备...................................................................27BTVVP7重组蛋白抗原的制备..........................................................

4、.28BTVVP7蛋白特异性单克隆抗体的制备....................................................49样品采集和处理.................................................................510竞争酶联免疫吸附试验抗体检测方法.................................................511结果判定...............................................

5、.........................6附录A(规范性附录)溶液配方.......................................................8ISZDB/Z129—2015前言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由检验检疫科学研究院提出。本标准起草单位：深圳市检验检疫科学研究院、深圳出入境检验检疫局动植物检验检疫技术中心。本标准起草人：杨俊兴、花群义、孙洁、刘建利、林庆燕、吕建强、曹琛福、曾少灵、阮周曦、张彩虹、陶虹、陈兵、叶奕优、黄超华、冯倩、卢体康、廖立珊、唐金

6、明。IISZDB/Z129—2015蓝舌病病毒抗体检测竞争酶联免疫吸附法1范围本标准规定了检测蓝舌病病毒抗体的竞争酶联免疫吸附试验及试剂制备方法。本标准适用于蓝舌病病毒抗体检测、流行病学调查和免疫监测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法SN/T2123出入境动物检疫实验样品采集、运输和保存规范《中国兽药典》第三部附录3.检测原理酶联免疫吸附试验是由酶分子

7、与抗体分子共价结合形成酶标记抗体，此种结合不会改变抗体的免疫学特性，也不影响酶的生物学活性。通过此种酶标记抗体与吸附在固相载体上的抗原发生特异性结合，当加入底物溶液后，底物可在酶作用下使其所含的供氢体由无色的还原型变成有色的氧化型，从而出现显色反应，此种显色反应可通过酶标仪进行定量测定，从而通过底物的显色反应来判定有无相应的免疫反应。本标准中被检血清和蓝舌病病毒VP7蛋白特异性单克隆抗体先后加入已用蓝舌病病毒VP7蛋白包被的96孔酶标板孔内，二者竞争与孔内特异性包被抗原结合，加入酶标辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠IgG，洗涤后，然后加入底

8、物显色。待检血清中蓝舌病病毒特异性抗体含量越高，则特异性单克隆抗体与包被抗原结合的就相对少，显色越浅；反之，显色越深。使用酶标仪测定反应物的OD450值，计算抑制百分率（PI），根据PI值判定试验结果。4缩略语下列缩略语