亚硝酸盐含量测定

《亚硝酸盐含量测定》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、生物综合实验食品中亚硝酸盐的测定A组杜晨李沛钿2010/11/12一、实验原理：试样经沉淀蛋白质，除去脂肪后，在弱酸条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后，再与盐酸萘乙二胺耦合形成紫红色化合物，颜色的深浅与亚硝酸盐的含量成正比，其最大吸收波长为538nm，可测定吸光度，并与标准样品比较定量。二、试剂和溶液：分析中，除非另有说明，限用分析纯试剂、去离子水或相同纯度的水。1）标准亚硝酸钠溶液：用亚硝酸钠（分析纯）配置成5μg/ml的标准蛋白质溶液。标准亚硝酸钠溶液的配置：称取亚硝酸钠0.005g，溶于950ml蒸馏水中，定量移入1000ml容量瓶中，稀释至刻度，混匀。此

2、溶液1ml，含亚硝酸钠5μg。2）4g/L对氨基苯磺酸溶液：称取0.4g（实称0.4050g）对氨基苯磺酸，溶于100ml20%盐酸中，置于棕色瓶中混匀，避光保存。3）2g/L盐酸萘乙二胺溶液：称取0.2g（实称0.2050g）盐酸萘乙二胺溶解于100ml水中，混匀后，置于棕色瓶中，避光保存。三、仪器：1）可见分光光度计；2）50ml比色皿7个，容量瓶，烧杯，玻璃棒等。四、分析步骤：（1）标准曲线的绘制：1）标准比色溶液的配置：适用于3cm光径长度比色皿的光度测量。取7支50ml比色皿，分别加入0、0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml标准亚硝酸

3、钠溶液（浓度为5μg/ml），第7支比色皿加1ml待测液。再分别向7个试管中加入2.0ml对氨基苯磺酸溶液，混匀后，静置3-5min；再分别向7支比色皿加1ml盐酸萘乙二胺，混匀静置15min，再加水至50ml。表一:标准亚硝酸钠溶液中亚硝酸钠的含量试剂管号1234567待测液/ml0000001对氨基苯磺酸/ml2.02.02.02.02.02.02.0亚硝酸钠标准溶液/ml00.20.40.60.81.00盐酸萘乙二胺溶液/ml11111112）吸光度测定：加完蒸馏水2—5min后，即可开始用1cm比色皿，在分光光度计上测定各样品在538nm处的吸光度。3）标准

4、曲线的绘制：以标准亚硝酸钠（μg）为横坐标，相应的吸光度值为纵坐标，用Excel作图。表二：7组浓度测得吸光度值管号1234567（待测）标准亚硝酸钠溶液体积/ml00.20.40.60.81.0亚硝酸钠的对应量/μg012345吸光度值00.0130.0300.0410.0610.0730.039生物综合实验表三：标准曲线图（A=εbc）标准亚硝酸钠质量（μg）（2）样品的测定：1）①试样及试液准备：称取5.0g试样，置于50ml烧杯，加入12.5ml硼砂饱和溶液混匀，70℃左右加热，加入约300ml的水将试样加在500ml容量瓶，沸水浴15ml，冷却，边转动边加

5、入5ml亚铁氰化钾，摇匀，加5ml醋酸锌沉淀蛋白质，加水至刻度混匀放置0.5h除去上层脂肪，滤纸过滤，备用。2）空白试验：取1ml蒸馏水代替样品作为空白对照。按上述操作步骤进行空白试验，除不用样品外，操作手续和应用的试剂与测定试样时相同。通常样品的测定也可与标准曲线的测定放在一起，同时进行。3）吸光度测定：与标准曲线绘制方法相同，对试验及空白试验溶液进行光度测定，测定其吸光度。4）测得吸光度：A=0.039的五、分析结果和计算根据所测样品的吸光度值，在标准曲线上查出相应的蛋白质质量，从而计算出样品溶液的亚硝酸钠含量。X=A×100M×V2/V1×100式中：X→试样

6、中亚硝酸盐含量mg/kg；m→样品质量，g。A→测定用样液中亚硝酸盐的质量（由标准曲线得）μgV1→试样处理液兑体积mlV2→测定用样液体积ml六、计算：