一步法超级荧光定量PCR实验(探针法)

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1、一步法超级荧光定量PCR实验（探针法）产品特点◎逆转录和定量PCR在一个反应管内一步完成，操作简便快速；◎使用化学修饰的热启动聚合酶，反应特异性高，有效避免了非特异扩增；◎反应缓冲液经充分优化，灵敏度高，最低可检测1pg总RNA中的目标片段,特别适合低拷贝RNA的检测。◎添加了百代生物RT-PCR专利活素，可明显提升RT-PCR的产量，CT值一般早3-5循环，S型曲线更加典型。产品介绍BIOGHSCSuperProbeHi-ROXOneStepKit专为以RNA为模板的定量PCR检测而设计，适合

2、荧光探针法定量PCR分析。使用BIOGHSCSuperProbeHi-ROXOneStepKit，逆转录和定量PCR在一个反应管内一步完成，中间无开管和移液动作，操作非常简便，也大大提高了实验的效率，并降低了反应的污染风险。BIOGHSCSuperProbeHi-ROXOneStepKit使用我们最新研制优化的缓冲液，确保了反转录和定量PCR反应能够快速、高效地完成。BIOGHSCSuperProbeHi-ROXOneStepKit的检测灵敏度可达到1pg总RNA，与其它品牌的同类产品相比，具有

3、更高的检测灵敏度。各反应成分以Mix的形式提供，非常方便实验者使用。产品成分反应体系组分100个反应250个反应2xBIOGHSCSuperProbeMix10μlBIOGHSCSuperEnzymeMix0.3μlRNasefreeddH2O1ml1.25ml×2RT-PCREnhancer0.25μl2×BIOGHSCSuperProbeMix1ml1.25ml×2上下游引物(10μM)各0.6μlBIOGHSCSuperEnzymeMix30μl75μlTaqManProbe(10μM)0

4、.5μl50×ROXReferenceDye0.4μlRT-PCREnhancer25μl62.5μl模板RNA10ng-1μg50×ROXReferenceDye40μl100μlRNasefreeddH2O加至20µl说明：1、BIOGHSCSuperProbeMix包含dNTPMix和Mg2+，BIOGHSCSuperEnzymeMix包含BIOG超级逆转录酶和BIOG热启动聚合酶、荧光保护素。2、一般来说反应体系中引物终浓度为0.3μM可得到较好的扩增效果。当反应结果不理想时，可以在0.

5、1-1.0μM范围内调整引物浓度。3、TaqMan探针终浓度可以在0.1μM-0.45μM之间调整。4、qPCR反应灵敏性高，模板量的准确性对结果影响很大，建议将模板适度稀释后加入，或用50µl反应体系。5、模板体积最好不超过反应体积的10%。6、扩增产物长度请选择在100bp-500bp范围内，最好为100-200bp。7、配制反应体系时，避免震荡混匀，以防气泡产生。8、反应条件：先于42℃逆转录反应15分钟，再于95℃加热10分钟，以激活热启动DNA聚合酶，然后95℃15秒，60℃35秒，3

6、5-40个循环。该反应条件可根据目标片段的大小、引物的Tm值等适当调整。8、如果模板具有复杂二级结构，可将反应温度提高至55℃，有助于提高产量。