流式原理-南开大学

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1、流式细胞仪的原理BD公司生物科学部梁璐流式细胞术概述流式细胞术的基本概念流式细胞术（FlowCytometry,简称FCM）是一种可以快速、准确、客观，并且能够同时检测快速直线流动状态中的单个微粒（通常是细胞）的多项特性，并加以定量的技术，同时可以对特定群体加以分选研究对象为生物颗粒，如各种细胞、微生物及人工合成微球等BDBiosciencesImmuneFunction样本可检测的样本种类多样：•细胞悬液：分离PBMC、PRP等：操作复杂，分离、离心步骤导致细胞特定群体丢失，并可能引入某些误差直接使用外周血、骨髓：最接近生理状况，操作简便，样本用

2、血量小灌洗液、体腔积液培养细胞、细胞系•实体组织：Medimachine病理组织：新鲜样本/石蜡包埋样本针吸组织：新鲜样本•New!血清、血浆、培养上清、细胞裂解液BDBiosciencesImmuneFunction样本•样本制备：单细胞悬液（天然，机械研磨/消化）5×105～1×106cells/ml，约0.5～1ml，300目筛网过滤•鞘液、洗液、PMA等：清洁无颗粒杂质BDBiosciencesImmuneFunction流式细胞仪的检测范围细胞结构细胞功能细胞大小细胞表面/胞浆/核的特异细胞颗粒度性抗原细胞表面面积细胞活性核浆比例

3、细胞内细胞因子DNA含量与细胞周期酶活性RNA含量激素结合位点蛋白质含量细胞受体BDBiosciencesImmuneFunction流式细胞仪的应用原理流式细胞仪工作原理通过激光激发高速流动的单个细胞所携带的各种荧光素和荧光染料，并检测由此产生的散射光和荧光染料的发射光，通过各种光信号的强弱来反应细胞的各种特征。BDBiosciencesImmuneFunction散射光信号LaserFALSSensorBDBiosciencesImmuneFunction散射光信号RightAngleLightDetectorCellComplex

4、itySSCIncidentForwardLightLightDetectorSourceCellSurfaceAreaFSC=前向角散射光（FSC,ForwardScatter）细胞相对大小及其表面积=侧向角散射光（SSC,SideScatter）细胞颗粒度及细胞内细胞器的相对复杂性BDBiosciencesImmuneFunction外周全血细胞散射光双参数点图颗粒杂质、气泡（红细胞溶解后）对检测的影响BDBiosciencesImmuneFunction流式细胞仪的检测信号荧光信号•使用荧光标记的单克隆抗体染色，做多色分析•荧光信号的强弱，反映

5、了细胞抗原的表达含量BDBiosciencesImmuneFunction特异性荧光信号•自发荧光，噪声信号•特征荧光，强度弱、波长与照射激光不同BDBiosciencesImmuneFunction荧光信号双色直接染色BDBiosciencesImmuneFunctionTheuseofmultiplefluorescentprobesprovidesinformationregardingtheco-expressionofmultipletargets区别荧光素的激发和发射光谱•任何发荧