霉菌污染的处理方法

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时间:2018-02-04

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1、避免真菌污染的几个措施:1、严格的无菌操作;2、无菌间定期打扫、消毒,保持干燥;3、各种培养液、培养器皿的严格消毒;4、温箱中消毒水中放置过饱和的消毒的磷酸氢二钠或者硫酸铜。如果细胞好养或有存货的话,干脆从头作起,要是舍不得可以用PBS液洗3遍,在新的培基中加两性霉素。比如霉菌包子感染可能这样,因为我的前面一批细胞就这样,培养基不混,细胞内有很多空泡,且可见一些比细胞大得多无明显细胞结构的“圆形细胞”里面有很多小的空泡,如果是这样的话,那就是霉菌污染(1)操作:做实验时应养成无菌观念(操作前用70%酒精檫手,实验时如吸管等物品接触到台面应立即

2、更换,并隔3-5分钟用酒精灯烧灼吸管)。(2)超净台:如果超净台使用时间过长(3-5年以上),应及时更换滤板。消毒的紫外灯管也按时更换。在操作前用酒精或新洁尔灭檫拭台面。(3)孵箱:怀疑孵箱污染时,将孵箱关掉,然后用上述消毒剂消毒,之后用移动紫外消毒车将紫外灯插入孵箱照射30分钟以上。zrzhong6519:还有注意孵箱内的水盆,经常检查,如发现有絮状物,立即更换灭菌水,之前用75%乙醇擦拭,第二天要及时察看是否彻底,不彻底在按上述方法再来。天气炎热,霉菌也开始肆无忌惮的繁殖。想想去年这个时候,也被霉菌折腾得郁闷无比。还好后来控制住了。经验如

3、下:1、细胞培养室大扫除,水池、吸引器中的引流瓶等无一不是霉菌孳生的地方。然后室内进行紫外灯照射杀菌。2、培养箱消毒时是否注意了里面的几层钢板。紫外线照射时得拿出来。我当时干脆就放到180度烤箱里考过夜。3、处理培养箱时还有个要考虑的地方,培养箱内的细胞培养瓶。重新放回去的时候得用酒精将瓶周搽洗数次,能换掉更好。4、培养箱搽洗时重点在箱底的四个角落。整个培养间用福尔马林和高锰酸钾熏蒸,孵箱内部包括托盘等全部用苯酚搽洗,封闭2天,基本就没问题!!但培养良好的无菌观念是前提!可能的原因:1、天气太热,实验者在培养和接种或者换液时出汗(有空调稍好,

4、但是手也出汗)。2、培养间里可能暗藏污染原。3、注意培养箱(这点最重要),仔细检查培养箱里的隔板的下面,有可能有霉菌斑。(我遇到过)4、培养基污染多数是配置过程中造成的,仔细检查配置过程用到的器具。5、血清过期一个月,如果保存的好应该没有问题,但是保存不好,新来的血清,用一次就可能污染。血清过期和污染是否有必然的联系不好说,个人体会觉得其联系不大。解决办法:1、彻底清洁培养间,显微镜室。然后,紫外灯多照射一端时间消毒空气。2、彻底清洁培养箱:(1)每个隔板仔细清洗,火烤。(2)培养箱大换水,换成新鲜干净的蒸馏水。(3)培养箱内壁用酒精棉球或者

5、稀过氧乙酸认真擦洗。(4)紫外灯长时间照射(一天)。3、实验用器械消毒:注意消毒时间和压力,有必要检查压力锅和校正压力表是否准确。4、一次性手套在打开使用前一天放入无菌间照射消毒。5、如果用双抗,应该现用现配。6、注意过滤器的消毒灭菌。7、过期的血清,可以做培养检查是否被污染。如有怀疑,建议不用。8、检查培养间和超净台的通风过滤网,如果脏了,需要更换。总之,潮湿闷热天气培养细胞非常容易污染,必须注意每一个环节。真菌多数是空气中悬浮污染,所以除紫外线照射外,每次进出培养间要用来苏或者新洁尔灭搽地,减少空气悬浮颗粒及细菌1、用碘伏仔细擦洗浮箱和操

6、作台,地面,然后用紫外灯照1小时2、处理完细胞放回浮箱是用酒精棉擦培养瓶的底部避免污染,我认为:1、每次做完实验,超净台要用酒精喷擦;打开紫外线照射;2、严格无菌操作;3、孵箱定期清洗,换水;4、每次观察细胞后,酒精喷瓶口;1、我操作的时候,总是在灭菌同时超净台外侧窗口处,喷一些医用酒精,以控制周围附近的空气中漂浮菌。2、在做完试验后,超净台里喷一遍医用酒精,然后严格按照紫外灭菌等操作。3、还有,超净台长时间使用了的话,要把里面的防尘过滤网拆下来,用吸尘器或者其他东西吸净,洗净。

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