双水相萃取pc(1)

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1、实验方案：双水相萃取纯化藻蓝蛋白一.藻蓝蛋白粗提液的制备（1）.准确称取8g螺旋藻粉，加入100ml的去离子水，采用超声波行细胞破碎，条件为：超声7s，间隔5s，工作30次，循环三次。将得到的破碎液包于4000r/min的条件下离心20min，弃沉淀，取上清液，加入研磨好的硫酸铵使溶液的硫酸铵饱和度达为25%，静置片刻，10000r/min，离心20，沉淀保存，上清液复加硫酸铵至其溶液饱和度的55%，4摄氏度静止15h（或者过夜），10000r/min，离心20min，上清保存，沉淀用尽可能少的0.002mol/EDTA、pH=6.7的磷酸盐缓冲液溶解，在波长650、620

2、、280、250nm下测量吸光度（同时需对之前保存沉淀的纯水溶解液以及上清液做光谱扫描）。二.双水相萃取分离室温下在10ml带盖离心管中将一定量的酒石酸钾钠和PEG2000混合,加入上述获得的藻蓝蛋白粗提液2ml,用去离子水调节至双水相总质量为10g，于快速混匀器上混合3min（条件不足，用每分钟倒置8次，重复10min取代），静止30min，在2000r/min条件下离心1min，加速系统分相，测量上下相的体积。用移液枪吸取上下相溶液，在650、620、280、250nm下测量溶液的吸光度，计算藻蓝蛋白的浓度和纯度。PC浓度=（A620-0.474*A650）/5.34P

3、C纯=A620/A280三.关于双水相萃取分离纯化时PEG、酒石酸钾钠溶液的质量分数以及pH值的选取根据相关论文的资料，选取的PEG平均相对分子量为2000，PEG溶液的质量分数为16%，酒石酸钾钠溶液的质量分数为21%，溶液的pH为6.0时，萃取分离纯化的效果最佳。四.多次萃取对于萃取完毕的双水相体系，弃除下相溶液，向上相溶液中加入一定量的新酒石酸钾钠溶液，使双水相体系统的条件第一次萃取的相同。实验进度：1.Pc的粗提液已制备完毕；2.研究探讨超声破碎循环次数对pc提取率的影响；3.双水相萃取的第一次萃取已结束，得到提取的pc液纯度约为2.0（A620/A280）较预期的

4、3.0偏低，两水相界面存在Pc沉淀，考虑与PEG2000和酒石酸钾钠在双水相中的质量分数有关，应进行改进，同时可以考虑加入少量的中性盐kcl进行比较，探讨对pc纯度以及提取率有无影响1.已开始进行二次萃取，具体pc的纯度有待实验的进一步测量实验预期安排：1.完成超声破碎循环次数对Pc纯度已提取率的影响实验；2.稳定初步双水相萃取，得出较佳的PEG2000和酒石酸钾钠的质量分数；3.进行多次双水相萃取，得出更高纯度的pc液，并结合柱层析。