琼脂糖凝胶电泳SOP

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1、琼脂糖电泳操作PROTOCOL一、材料、试剂和器材1、DNA样品。2、琼脂糖。3、5×TBE缓冲液：使用时十倍稀释。4、溴化乙锭（EB）储备液：10mg/ml水溶液。5、上样缓冲液。6、DNA分子量标准。7、电泳槽、电泳仪、紫外检测仪、微量加样枪。二、操作步骤1、琼脂糖凝胶液配制称取1克琼脂糖，置于干净的三角瓶中，加入100ml0.5×TBE缓冲液，在微波炉中加热1min，使之彻底融化。之后，加入3µlEB储备液混合（终浓度0.5pmg/ml），即制成1％的琼脂糖溶液。此为示例，琼脂糖浓度应根据实际要求配置。2、凝胶板的制备将电泳装置所配备的塑料胶托盘放置在胶

2、槽中，注意托盘的放置位置。水平地放在桌面上。在胶模的标有黑色条带的一端放上样品梳。将上述琼脂糖溶液放在室温下，待温度下降至60℃时，倒在凝胶板模具上，室温放置0.5小时左右。待琼脂糖彻底凝固后，轻轻拔出样品梳。3、加样将凝胶连同塑料托盘一起放置到电泳槽中，加入0.5×TBE缓冲液，使缓冲液淹过凝胶表面约1mm。用微量加样品吸取0.5-1µgDNA样品，按一定（上样缓液：DNA样品＝1：10）的比例（体积/体积）加入上样缓冲液。混合后吸取10－20ul小心地加到凝胶板上的加样孔中。按同样的方法在附近的加样孔中加入已知分子量的标准DNA，作为参照。4、电泳与观察加

3、样的一端接负极，另一端接正极。以适当电压电泳0.5－1小时。当指示剂泳动到距凝胶前沿约1厘米的位置时，停止电泳。带上手套将凝胶板出，置于紫外分析仪下观察和照相。安全注意：试验中使用的溴化乙锭（EB）为强致癌剂！试验中所有的物品，包括烧杯、胶、手套都不要带到他处！