聚合酶链式反应

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1、聚合酶链式反应定义1:用引物和DNA聚合酶进行体外扩增特定的DNA区域的一种技术。应用学科:生态学(一级学科);分子生态学(二级学科)定义2:体外酶促合成特异脱氧核糖核酸片段的技术。应用学科:水产学(一级学科);水产生物育种学(二级学科)定义3:通过DNA互补双链解链、退火和聚合延伸的多次循环来扩增DNA特定序列的方法。应用学科:细胞生物学(一级学科);细胞生物学技术(二级学科)定义4:由穆利斯(K.B.Mullis)于1988年首创的一种在体外模拟发生于细胞内的DNA快速扩增特定基因或DNA序列的复制过程的技术。应

2、用学科:遗传学(一级学科);分子遗传学(二级学科)以上内容由全国科学技术名词审定委员会审定公布求助编辑百科名片  概述  DNA聚合酶(DNApolymeraseI)最早于1955年发现,而较具有实验价值及实用性的Klenow  fragmentofE.Coli则是于70年代的初期由Dr.H.Klenow所发现,但由于此酶不耐高温,高温能使之变性,因此不符合使用高温变性的聚合酶链式反应。现今所使用的酶(简称Taqpolymerase),则是于1976年从温泉中的细菌(嗜热菌)(Thermusaquaticus)分离出

3、来的。它的特性就在于能耐高温,是一个很理想的酶,但它被广泛运用则于80年代之后。PCR最初的原始雏形概念是类似基因修复复制,它是于1971年由Dr.KjellKleppe提出。他发表了第一个单纯且短暂性基因复制(类似PCR前两个周期反应)的实验。而现今所发展出来的PCR则于1983由Dr.KaryB.Mullis发展出的,Dr.Mullis当年服务于PE公司,因此PE公司在PCR界有着特殊的地位。Dr.Mullis并于1985年与Saiki等人正式发表了第一篇相关的论文。此后,PCR的运用一日千里,相关的论文发表质量

4、可以说是令众多其它研究方法难望其项背。随后PCR技术在生物科研和临床应用中得以广泛应用,成为分子生物学研究的最重要技术。Mullis也因此获得了1993年诺贝尔化学奖。PCR原理DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下和接近沸点的温度下加热可以变性解旋成单链,在DNA聚合酶的参与下,根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝。在实验中发现,DNA在高温时也可以发生变性解链,当温度降低后又可以复性成为双链。因此,通过温度变化控制DNA的变性和复性,加入设计引物,因为DNA聚合酶需要一小段

5、双链DNA来来引导双链的合成。事实上,新合成的DNA链的起点是由加入在反应混合物中的一对寡核苷酸也就是引物在模板DNA链两端的退火位点决定再加上DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。  但是,DNA聚合酶在高温时会失活,因此,每次循环都得加入新的DNA聚合酶,不仅操作烦琐,而且价格昂贵,制约技了PCR

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