SN-T 2670-2010 番茄环斑病毒检疫鉴定方法

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1、中华人民共和国出入境检验检疫行业标准!"!#!"#$"!$%$番茄环斑病毒检疫鉴定方法$%&'&()*(+*,+()*-*.&)*/(/-)/0&)/'*(123/)4*'%2!$%$5%%5$%发布!$%%5$&5$%实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局犛犖／犜２６７０—２０１０前言本标准按照ＧＢ／Ｔ１．１—２００９给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位

2、：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国厦门出入境检验检疫局、中华人民共和国北京出入境检验检疫局。本标准主要起草人：陈红运、邓丛良、陈青、赵文军、黄文胜、廖富荣、林石明、朱水芳。Ⅰ犛犖／犜２６７０—２０１０番茄环斑病毒检疫鉴定方法１范围本标准规定了番茄环斑病毒检疫鉴定方法。本标准适用于可能携带番茄环斑病毒的进境种子、苗木、组培苗等繁殖材料的检疫与鉴定。２规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。ＳＮ／Ｔ１８６０植物病毒免疫电镜检测方法ＳＮ／Ｔ２１２２进出境植物及

3、植物产品检疫抽样３原理３．１学名与分类地位学名：ｔｏｍａｔｏｒｉｎｇｓｐｏｔｖｉｒｕｓ缩写：ＴｏＲＳＶ分类地位：豇豆花叶病毒科（Ｃｏｍｏｖｉｒｉｄａｅ）；线虫传多面体病毒属（犖犲狆狅狏犻狉狌狊）。其他资料参见附录Ａ。３．２粒体形态番茄环斑病毒粒体为等轴对称二十面体，直径２８ｎｍ。３．３基因组基因组由两条单链正义ＲＮＡ组成，ＲＮＡ１为８．２ｋｂ，ＲＮＡ２为７．３ｋｂ。多个分离物的基因组已被测序，各分离物之间序列同源性较低，根据依赖于ＲＮＡ的ＲＮＡ聚合酶编码区序列设计ＰＣＲ引物可检测烟草株系（Ｔｏｂａｃｃｏｓｔｒａｉｎ）、桃黄芽花叶株系（Ｐｅａｃｈｙｅｌｌｏｗｂｕｄｍｏｓａｉｃｓｔｒａｉｎ）

4、、葡萄黄脉株系（Ｇｒａｐｅｙｅｌｌｏｗｖｅｉｎｓｔｒａｉｎ）及多个ＴｏＲＳＶ分离物。４仪器设备、用具及试剂４．１仪器设备酶联检测仪、天平（感量，１／１００００ｇ）、ＰＣＲ仪、电泳仪、电泳槽、凝胶成像系统、隔离温室、组织捣碎机、恒温水浴、低温冰箱等。４．２用具微量移液器（２．５、１０、２０、１００、２００、１０００）、酶联板、研钵等。μＬμＬμＬμＬμＬμＬ１犛犖／犜２６７０—２０１０４．３试剂酶联免疫吸附测定试剂（见附录Ｂ）、反转录聚合酶链式反应（ＲＴＰＣＲ）检测试剂（见附录Ｃ）。５样品制备５．１种子抽样按照ＳＮ／Ｔ２１２２的规定执行。将种子（重点挑取畸形、不成熟的种子）播于灭菌土中，

5、于２５℃生长并进行症状观察。待长出３片～４片叶后将表现症状的植株编号，未表现症状的植株分组（１０株为１组）并编号。５．２苗木按ＳＮ／Ｔ２１２２规定抽样。将苗木种植于隔离温室中，于２５℃生长并进行症状观察。有症状的苗木单独检测。没有症状的分组检测，分组方法同５．１。６检测方法６．１酶联免疫吸附测定见附录Ｂ。６．２犚犜犘犆犚检测见附录Ｃ。６．３免疫电镜检测按照ＳＮ／Ｔ１８６０的规定执行。６．４生物学测定参见附录Ｄ。７结果判定６．１、６．２和６．３中的两种方法检测结果为阳性，即可判定检出番茄环斑病毒。酶联测定为阳性后，ＲＴＰＣＲ或免疫电镜检测结果为阳性可判定检出番茄环斑病毒。必要时可进行生

6、物学测定，并进行复验。８样品保存８．１样品保存经检验确