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时间：2021-12-10
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1、实验二、线粒体的活体染色线粒体的活体染色一、实验目的：1、观察动物活细胞内线粒体的形态、数量与分布。2、掌握线粒体的活体染色原理及方法。3、小鼠肝脏细胞线粒体染色及观察。线粒体的活体染色线粒体是细胞内一种重要细胞器，是细胞进行呼吸作用的场所。细胞的各项活动所需要的能量，主要是通过线粒体呼吸作用来提供的。活体染色是应用无毒或毒性较小的染色剂真实地显示活细胞内某些结构而又很少影响细胞生命活动的一种染色方法。詹纳斯绿B（JanusgreenB）是线粒体的专一性活体染色剂。线粒体中细胞色素氧化酶系使染料保持氧化状态呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被还原，成为无色状态。二、实验原理：线粒体的活体染色
2、不同细胞中线粒体的形态和数目不同。在电子显微镜下，线粒体的外形多样，如圆形、椭圆形、哑铃形和杆状。线粒体的数目与细胞类型和细胞的生理状态有关，线粒体多聚集在细胞生理功能旺盛的区域。线粒体脊的数目与分布方式是多种多样的。一般与线粒体长轴垂直排列，但也可见到与线粒体长轴平行排列的脊。脊的横切面呈囊状或管状。脊的数量与细胞呼吸机能的强度有很大关系。线粒体的活体染色三、实验用品1.器材：显微镜、手术器械、载玻片、盖玻片、吸管、牙签、吸水纸、小平皿。2.试剂：Ringer液、1/5000詹纳斯绿B、1%甲苯胺兰。3.材料：人口腔上皮细胞、小白鼠肝细胞。线粒体的活体染色四、实验方法（一）人口腔上皮细胞
3、的制备与观察用牙签刮取口腔上皮细胞均匀地涂在载片上(不可反复涂沫)，滴一滴甲苯胺兰染液，染色5分钟，盖上盖片，吸去多余染液。显微镜下观察可见覆盖口腔表面的上皮细胞为扁平椭圆形，中央有椭圆形核，染成蓝色。线粒体的活体染色（二）、线粒体的活体染色与观察1、人口腔上皮细胞线粒体的超活染色观察1）取清洁载玻片放在37℃恒温水浴锅的金属板上，滴两滴1/5000詹纳斯绿B染液。线粒体的活体染色2）实验者用牙签宽头在自己口腔颊粘膜处稍用力刮取上皮细胞，将刮下的粘液状物放入载玻片的染液滴中，染色10—15分钟（注意不可使染液干燥，必要时可再加滴染液），盖上盖玻片，用吸水纸吸去四周溢出的染液，置显微镜下观察
4、。3）在低倍镜下，选择平展的口腔上皮细胞，换高倍镜进行观察。可见扁平状上皮细胞的核周围胞质中，分布着一些被染成蓝绿色的颗粒状或短棒状的结构，即是线粒体。线粒体的活体染色2、小白鼠肝细胞线粒体的活体染色观察1)用脊椎脱臼法处死小白鼠，置于解剖盘中，剪开腹腔，取小白鼠肝边缘较薄的肝组织块，放入表面皿内。用吸管吸取Ringer液，反复浸泡冲洗肝脏，洗去血液。2)在干净的平皿中，
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