细菌革兰氏染色

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1、细菌革兰氏染色法巴州质检所阿依尼萨.艾依提微生物中细菌是很小的生物体，无色透明，未经染色往往不易被识别，因此只有借助于染色法可使细菌着色，与背景形成鲜明对比，才容易在显微镜下观察。并且还可以通过染色的方法鉴别革兰氏染色特性.革兰氏染色革兰氏染色反应是细菌分类和鉴定的重要性状。它是1884年由丹麦医师Gram创立的。革兰氏染色法（Gramstain）不仅能观察到细菌的形态，而且还可将所有细菌区分为两大类：染色反应呈蓝紫色的称为革兰氏阳性细菌，用G+表示；染色反应呈红色的称为革兰氏阴性细菌，用G-表示。革兰氏

2、染色是细菌学上最常用的鉴别染色法。实验材料活材料：培养18-24h的大肠杆菌染色液和试剂：结晶紫、卢哥氏碘液、95%酒精、复红、二甲苯、香柏油。器材：无菌水、废液缸、洗瓶、载玻片、接种杯、酒精灯、擦镜纸、显微镜。革兰氏阳性菌细胞壁结构图革兰氏染色阳性细菌肽聚糖层厚，含量多，经乙醇处理后使之发生脱水作用而使孔径缩小，结晶紫与碘的复合物保留在细胞内而不被脱色，复染后不着色，不留结晶紫的颜色；实验原理革兰氏阴性菌细胞壁结构图而革兰氏染色阴性细菌肽聚糖层很薄，含量少，脂肪含量高，经乙醇处理后部分细胞壁脂类可能被溶

3、解并改变其组织状态，细胞壁孔径变大或通透性增加，不能阻止溶剂透入，酒精将结晶紫与碘的复合物洗脱，细菌被脱色，经复染后染成红色，实验原理实验原理所有本实验的成败关键是酒精脱色，脱色不够将革兰氏染色阴性转变为革兰氏染色阳性，脱色过度将革兰氏染色阳性变成革兰氏染色阴性。其次涂片要均匀、薄；再者菌龄也可影响染色性，菌龄老，陈旧的细菌培养物，往往G+转变成G-，一般做革兰氏染色用18小时左右的细菌培养物，不要超过24小时，以免影响染色性。革兰氏染液1、碱性染料（美蓝、碱性复红、结晶紫）2、媒染剂（碘液）3、脱色剂（

4、95%的乙醇）4、复染液（复红溶液、番红溶液、沙黄溶液）染色程序干燥固定结晶紫染色大肠金葡涂片:液体培养基、固体培养基干燥：自然干燥。固定：酒精灯下固定3-4次。（杀死细菌、粘附、改变通透性）初染：结晶紫染色1分钟。染色程序水洗：无菌水轻洗。水洗碘液媒染水洗95%酒精脱色媒染：碘液媒染1分钟。水洗：无菌水轻洗。脱色：95%酒精脱色。复红复染水洗镜检G–杆菌G+球菌染色程序复染：复红染色30秒。镜检：红色—G-杆菌紫色—G+球菌水洗：无菌水轻洗。水洗水洗：无菌水轻洗。结果判断红色为革兰氏阴性菌大肠埃希氏菌结

5、果判断紫色为革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌注意事项1．标本涂片不能太厚，严格按操作要求进行。3．玻片通过火焰温度不能太高。2．若涂片较厚，应延长脱色时间，直至不在出现紫色为止。简单染色法染色程序1、将菌制备成玻片，各玻片于染色前需先经过热固定。2、将玻片置于染色盘上，覆以染色液，并注意适宜的染色时间。3、以蒸馏水尖嘴瓶小心沖去过剩染色液，此时玻片应与水流成平行，如此可减少微生物自玻片中流失。4、以吸水纸吸干抹片，切勿揩拭。5、以油镜观察玻片。染色程序涂片干燥固定染色水洗干燥镜检结果判断金黄色葡萄球菌大肠杆菌