DB34∕T 3489-2019 猪瘟病毒抗体快速检测方法 镧系荧光免疫层析法(安徽省)

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1、TCS01.120A00DB34ET山巳....l-.且，文徽省万标准DB34/T3489-2019猪瘟病毒抗体快速检测方法榈系荧光免疫层析法TheRapidDetectionMethodsforAntibodiestoClassicalSwineFeverVirusLanthanideFluorescenceImmunochromatographicAssay2019-12-25发布2020-01-25实施安徽省市场监督管理局发布DB34/T3489--2019目IJ1=1本标准按照四月1.1-2009给出的规则起草。本标准由安徽农业大学提出井起草。本标准由安徽省农业标准化技术委员

2、会归口。本标准起草单位:安徽农业大学、安徽浩翔农牧有限公司、安徽冠华农牧有限公司、安徽禾丰浩翔农业发展有限公司、安徽省动物疫病预防与控制中心、阜阳市动物卫生监督所、怀宁县动物疫病预防与控制中心、巢湖市畜牧兽医同、六安市动物疫病预防与控制中心、成都微瑞生物科技有限公司。本标准主要起草人:李郁、何长生、占松鹤、谢玉洁、程竹兵、李春芬、程圣芳、高亚飞、段倩倩、孙裴、袁献宁、高亚成、蒋广志、张和森。DB34/T3489--2019猪瘟病毒抗体快速检测方法铺系荧光免疫层析法1范围本标准规定了猪瘟病毒抗体快速检测方法榈系荧光免疫层析法的原理、仪器和试剂、样品采集与处理、操作方法、结果计算、生物安

3、全和防污染措施。本标准适用于猪瘟病毒抗体的快速检测C2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，{叉所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB19489实验室生物安全通用要求GB/T27401实验室质量控制规范动物检疫NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范3原理榈系荧光免疫层析法Clanthanidefluorescenceimmunochromatographicassay,LFIA)快速检测猪瘟病毒抗体，系采用榈系元素铺CEu1)荧光纳

4、米微球作荧光示踪物，分别标记猪瘟病毒重组E2蛋白抗原和鸡IgY，并埋置在标记垫内。硝酸纤维素膜上检测线(T)包被猪瘟病毒重组E2蛋白抗原、参考线CC)包被山羊抗鸡IgY抗体。当血清样品抗体与榈系元素铺CEu1)荧光纳米微球标记的猪瘟病毒重组E2蛋白抗原接触反应后形成免疫复合物，继续与硝酸纤维素膜上检测线CT线)包被的猪瘟病毒重组E2蛋白抗原反应形成复合物:其余物质向前层析，在C线处包被的山羊扩L鸡IgY抗体与榈系元素铺(Eu'+)荧光纳米微球标记的鸡IgY结合形成免疫结合物。最后用榈系荧光分析仪读取检测卡上的荧光信号，经计算即可得出猪瘟病毒抗体效价。4仪器与试剂4.1仪器4.1.1榈

5、系荧光分析仪:激发波长为(400::1::20)nm，检测波长为(615::1::10)nmo4.1.2单道可调微量移液器O.5μL~10~L，20μL~200~L，100μL~1000μL4.1.3分析天平:精度。001g。4.1.4离心机:转速5000~15000r/mi丑。4.1.5冰箱20C~80C，-20oC。4.2试剂4.2.1实验用水:应符合GB/T6682中一级水的规格。DB34/T3489--20194.2.2样品稀释液4.2.2.1成分:棚酸2.16g，明砂1.43g，叠氮化铀0.25g，硫酸葡聚糖1.00g，蒸馆水1000mLo4.2.2.2制法:将上述成分溶解

6、泪匀后分装，保存于4"C备用。4.2.2.3所用试剂均为分析纯。4.2.3猪瘟病毒抗体榈系荧光免疫层析法检测试剂卡:见附录A。5样品采集与处理5.1样品的采集按照NY!T541的规定，采集待检猪血液样品3mL~5mL。5.2样品的处理血液样品用离心机3000r/min、离心3min，血清量不少于500!lLo5.3样品的贮存血清样品在20C~80C冷藏可保存24h，如需长期保存应置200C以下O6操作方法6.1准备使用前，将待检血清样品和猪瘟病毒抗体榈系荧光免疫层析法检测试剂卡平衡至230C~250C。6.2稀释用样品稀释液将持检血清样品按1:50稀释。6.3力日中羊将猪瘟病毒抗体榈

7、系荧光免疫层析法检测试剂卡水平放置，用移;夜器吸取己稀释好的待检血清样品80IIL垂直滴加于加样孔内。6.4检测避光层析15min后用搁系荧光分析仪进行检测O7结果计算B一一榈系荧光分析仪读取标准溶液或样品溶液的检测卡上的荧光信号T/C值Bo一一榈系荧光分析仪读取稀释液检测卡上的荧光信号的T!C值以标准品B-BO值的对数为横坐标，以猪瘟病毒抗体阳性血清效价对数为纵坐标，绘制标准曲线图。将样品的荧光信号值带入标准曲线中，从标准由线上读出样品所对应的猪瘟病毒抗