DB65∕T 3916-2016 草莓脱毒苗组培快繁技术规程(新疆维吾尔自治区)

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1、ICS65.020.20B05DB65新疆维吾尔自治区地方标准DB65/T3916•-2016草莓脱毒苗组培快繁技术规程Technicalspecificationformicropropagationofstrawberryvirus-freeseedlingsrq2016一08-04发布2016-09一04实施新疆维吾尔自治区质量技术监督局发布0865/T3916-一2016目IJ吕本标准按照GB/T1.1-2009<<标准化工作导则第1部分:标准的结构和编写》给出的规则起草。本标准由新疆生产建设兵团第十二师农业科学研究所提出。本标准由新疆维吾尔自治区

2、农业厅归口。本标准起草单位:新疆生产建设兵团第十二师农业科学研究所、新疆维吾尔自治区标准化研究院。本标准主要起草人:史芳芳、汪泉、李向泉、郭艳、胡晓憨、陈晓坤、胡小明、向征。ID865/T391ι一2016草莓脱毒苗组培快繁技术规程1范围本标准规定了草莓脱毒茵组培快繁技术的术语和定义、草莓组培快繁程序中的茎尖剥离技术及扩繁技术流程等要求。本标准适用于草莓脱毒茵的组培快繁技术规程管理的全过程。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注目期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单〉适用于本

3、文件。WS233-2002微生物和生物医学实验室生物安全通用准则DB33/T594.1一2005草莓脱毒种苗第1部分:脱毒种商DB3701/T83一2007草莓种苗繁育技术规程3术语和定义下列定义和术语适用于本文件。3.1叶原基Leafprimordium在茎尖生长点的基部形成的突起。3.2茎尖stemapex芽顶端部分(0.1mmr-..-10mm)其中包括分生组织(0.05mmr-..-O.lmm)及芽原基和正在发育的叶原基。3.3茎尖分生组织stem-apexmeristem茎部位具有持续和周期性分裂能力的细胞群。3.4增殖proliferation

4、外植体或继代组培苗产生出新的具有特定结构和功能的组织或器官的现象。3.51D865/T3916-一2016继代subculture培养过程中将培养材料周期性地分株、分割、剪截等转接于新鲜培养基上进行增殖的过程。3.6离体培养invitroculture从植物分离出符合需要的器官、组织、细胞、原生质体等，通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。3.7脱毒苗virus-freeseedling经检测确认不带草莓斑驳病毒、草莓轻型黄边病毒、草莓镶脉病毒和草莓皱缩病毒的试管苗。4草莓脱毒组培快繁程序4.1茎尖剥

5、离4.1.1外植体选择采样最佳时间为5月----8月晴天中午，选择回间生产茵中无病虫、品种纯正的健壮植株，切取带生长点的匍匍茎2cm，-......，3cm，用流水冲洗干净。品种选择按照DB3701月83-2007中的第5章执行。4.1.2茎尖剥离及接种将表面清洗干净的外植体移到超净工作台上剪掉芽上所有叶片，用70%酒精浸泡30s，用无菌水冲洗3次'-"""'5次，再移入O.1%升求溶液中浸泡3min'-"""'5min，用无菌水洗3次---5次。把消毒过的材料置于培养皿中灭菌滤纸上，吸去材料上的水分，先用慑子一层层剥去茎尖外的幼叶和鳞片，然后于解剖镜下(

6、解剖镜光源用冷光源)，找到生长点，用接种针挑出带1个'-"""'2个叶原基的生长点(长约0.2mm---0.3mm),转移到事先准备好的盛有诱导茎尖分化培养基〈见附录A)的培养瓶内，封好瓶口，置于培养室内培养。4.1.3茎尖分化诱导00将接种好的茎尖放置在温度为22C，-......，26C之间，光照强度20001x---30001x，光照时间为16h/d的培养室内，培养90d'"'"'120d，保持室内卫生，定期用84消毒液擦洗培养架和地板，当看到小苗长出根系并发育成带有3个'"'"'4个叶片的小植株时，经病毒检测不带病毒的株系方可进行扩繁。检测使用试剂

7、符合ws233-2002的规定。4.2脱毒苗扩繁程序4.2.1增殖继代培养经分化培养20d---30d后，茎尖分化出新芽并不断生长和增殖，形成芽丛。将分化产生的芽丛进行切割，每2芽'-"""'3芽切为一块，转接于草莓增殖培养基上(见附录A)，经过周期为20dr-..-30d的培养，继代3次'"'"'8次。在转接过程中，去掉原生叶片有利于新茵的分化:增殖培养中随时清除愈伤组织，有利于芽苗的增殖和生长。4.2.2生根培养20865/T3916:•2016切取在增殖培养中长成高达2cm以上的分生苗，转接于生根培养基上培养(见附录A)，培养条件同增殖培养，多数草莓

8、品种经15d"-'20d培养，即可生出优质新根，生根率达100%。