冰冻切片免疫组化

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1、精品文档1冰冻切片4~8um,室温放置30分钟后，入4c丙酮固定10分钟（另：丙酮先在-20C预冷,然后在4c固定片子15分钟，固定后在室温下干燥后再做免疫组化），PBS洗，5分钟X3。2用3%（另0.3%）过氧化氢孵育5~10分钟（另：最好是用3%H2O2甲醇溶液，室温20分钟。此配方不易产生脱片。配制方法是在9ml甲醇中加30%H2O21ml，混匀后使用，每次新鲜配制），消除内源性过氧化物酶的活性。PBS洗，5分钟X2。35~10%正常山羊血清（PBS稀释）封闭，室温孵育10分钟。倾去血清，勿洗，4滴加适当比例稀释的一抗或一抗工作液，37℃孵育1

2、~2小时或4℃过夜。5回收一抗，PBS冲洗，5分钟X3次。6滴加适当比例稀释的生物素标记二抗（1%BSA-PB淅释），37c孵育10~30分钟；或滴加第二代生物素标记二抗工作液，37℃或室温孵育10~30分钟。7PBS冲洗，5分钟X3次。8显色剂显色（DAB或AEc）。10自来水充分冲洗，复染，封片。如果你的组织曾放在多聚甲醛中固定的话，建议还是抗原修复效果比较好，如果没在甲醛中浸泡，无需抗原修复。如果你的片子切完后在冰箱中保存的话，做之前，从冰箱取出后先室温半小时，然后入37℃烤箱一小时，再进行免疫组化实验，掉片现象会少一点。我们以前片子从-20℃

3、取出后，接着就做免疫组化，片子掉得很多。