柑橘绿霉病拮抗菌的分离筛选及其产物特性研究

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1、柑橘绿霉病拮抗菌的分离筛选及其产物特性研究指状青霉Penicilliumdigitatum)引起的柑橘绿霉病(Citrusgreenmold)是柑橘采后贮运过程中最严重的病害之一,病原菌能产生大量易扩散的分生孢子使病害的传播十分迅速,在生产中造成了严重的损失。为获得对柑橘绿霉病有防治作用的拮抗菌,以指状青霉为指示菌,采用琼脂块对峙培养法从柑橘根系土壤中分离出414株细菌和58株放线菌，其中菌株X33抑菌活性最强。以菌株X33为研究对象进行了深入的研究，其结果如下：(1)根据培养特征观察、显微形态观察和16Sr

2、DNAff列分析等方法的鉴定，确定菌株X33为淡紫灰链霉菌(Streptomyceslavendulae)。目前国内外尚未见有用淡紫灰链霉菌来防治柑橘绿霉病的报道。(2)采用逐步筛选法和单因素试验优化淡紫灰链霉菌X33抑菌活性物质合成和菌体生长的培养基及培养条件。筛选得到的发酵培养基为：可溶性淀粉20.0g/L,牛肉膏3.0g/L,蛋白胨5.0g/L,KNO31.0g/L,K2HPO40.5g/L,NaCl5.0g/L。试验获得的适宜发酵条件为：30mL/250m廉液量，按9%勺接种量接入48h种子液,先在3

3、2℃、200r/min培养48h,然后在28℃、180r/min培养24h。(3)对淡紫灰链霉菌X33抑制指状青霉的的作用机理进行了初步研究，表明淡紫灰链霉菌X33产生的抑菌活性物质对指状青霉的菌丝有致畸、溶解的作用，能显著抑制分生孢子梗的生长和分生孢子的产生,延缓分生孢子的萌发。(4)用杯碟法研究淡紫灰链霉菌X33发酵液对细菌、酵母菌抑制作用,用菌丝生长速率法研究淡紫灰链霉菌X33发酵液对植物病原真菌的抑制作用。结果表明其发酵液对供试的3种革兰氏阳性细菌、3种革兰氏阴性细菌、4种酵母菌和7种植物病原真菌均具

4、有显著的抑制效果,其中对白地霉的抑制效果最好,相对抑制率达到了100%。(4)对淡紫灰链霉菌X33发酵液中抑菌活性物质的稳定性及极性进行了研究结果显示抑菌活性物质具有较好的耐酸碱和耐紫外线能力；但对热敏感,随着处理温度的升高，其抑菌效果逐步减弱，在115c加热30min后对指状青霉无抑制作用；抑菌活性物质易溶于水和甲醇等强极性溶剂,不溶于正己烷和石油醚等弱极性溶剂。(6)通过对小鼠进行急性经口毒性试验和亚急性经口毒性试验来研究淡紫灰链霉菌X33发酵液的安全性。急性经口毒性试验表明，淡紫灰链霉菌X33发酵液对小

5、鼠的LD50大于10g/kg•bw,说明受试物属于无毒级物质。亚急性经口毒性试验结果表明各组小白鼠生长发育良好,体重、食物利用率以及血常规等指标与对照组之间无显著差异,各组小白鼠组织解剖检查均未见有意义的病变。