鸭蛋白激酶APKA酶联免疫分析

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1、鸭蛋白激酶A(PKA)酶联免疫分析试剂盒利用说明书本试剂盒仅供研究利用。检测范围：96Tml-28ng/ml利用目的：本试剂盒用于测定鸭血清、血浆及相关液体样本中蛋白激酶A(PKA)含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中鸭蛋白激酶A(PKA)水平。用纯化的鸭蛋白激酶A(PKA)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入蛋白激酶A(PKA),再与HRP标记的蛋白激酶A(PKA)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，通过完全洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的蛋白激酶A(PKA)呈正相关。

2、用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(0D值)，通过标准曲线计算样品中鸭蛋白激酶A(PKA)浓度。试剂盒组成130倍浓缩洗涤液20mlX1瓶7终止液6mlX1瓶2酶标试剂6mlX1瓶8标准品(48ng/ml)XI瓶3酶标包被板12孔X8条9标准品稀释液XI瓶4样品稀释液6mlX1瓶10说明书1份5显色剂A液6mlX1瓶11封板膜2张6显色剂B液6MX1/瓶12密封袋1个标本要求1.标本搜集后及早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。假设不能马上进行实验，可将标本放于-20C保留，但应幸免反复冻融2.不能检测含NaM3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。操作

3、步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可依照以下图表在小试管中进行稀释。24ng/ml5号标准品150M的原倍标准品加入150W标准品稀释液12ng/ml4号标准品150M的5号标准品加入150川标准品稀释液6ng/ml3号标准品150M的4号标准品加入150川标准品稀释液3ng/ml2号标准品150M的3号标准品加入150川标准品稀释液ng/ml1号标准品150M的2号标准品加入150^1标准品稀释液2.加样：别离设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50卜山待测样品孔中先加样品稀释液40卜山然后再加

4、待测样品10川(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部，尽可能不触及孔壁，轻轻晃动混匀。1.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。2.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸镭水30倍稀释后备用3.洗涤：警惕揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。4.加酶：每孔加入酶标试剂50回，空白孔除外。5.温育：操作同3。6.洗涤：操作同5。7.显色：每孔先加入显色剂A50M，再加入显色剂B50g,轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.8.终止：每孔加终止液50出，终止反映（现在蓝色立转黄色）。9.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度

5、（OD值）。测定应在加终止液后15分钟之内进行。操作程序总结：准备试剂，样品和标准品加入准备好的样品和标准品，37T反应30分钟洗板5次，加入酶标试剂，37℃反应30分钟洗板5次，加入显色液A、B,37℃显色10分钟加入终止液15分钟之内读0D值计算计算以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，依照样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度：再乘以稀释倍数：或用标准物的浓度与OD值比算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。注意事项1.试剂盒从冷藏环境中掏出应在室温平稳15-30分钟后方可利用，酶标包被板开

6、封后如未用完，板条应装入密封袋中保留。2.浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不阻碍结果。3.各步加样均应利用加样器，并常常校对其准确性，以幸免实验误差。一次加样时刻最好操纵在5分钟内，如标本数量多，推荐利用排枪加样。4.请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量太高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释必然倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（XnX5）。5.封板膜只限一次性利用，以幸免交叉污染。6.底物请避光保留。7.严格依照说明书的操作进行，实验结果判定必需以酶标仪读数为准.8.所有样品，洗涤液和各类废弃物

7、都应按传染物处置。9.本试剂不同批号组分不得混用。保留条件及有效期1.试剂盒保留：；2-8-Co2.有效期：6个月345