白血病免疫分型 最新ppt课件

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1、白血病免疫分型正常血细胞从多能干细胞分化、发育、成熟为功能细胞的过程中，细胞膜、细胞浆或胞核抗原的出现、表达增多与减少甚至消失与血细胞的分化发育阶段密切相关，而且表现出与细胞系列及其分化程度相关的特异性。因此，这些抗原的表达与否可作为鉴别和分类血细胞的基础。白血病是造血系统的恶性肿瘤，在形态上变化虽相当大，但仍能表达正常血细胞所具有的抗原，因而仍可依据其抗原的表达谱对白血病进行免疫分型。由于白血病细胞具有肿瘤细胞的特征，其抗原表达又不完全同于正常血细胞，常可出现某些抗原缺乏、过度表达、系列交叉表达某一系列或阶段不应有的抗原，这又增加了白血病免疫分型的复杂性。白血病/淋巴瘤的

2、免疫分型已成为诊断血液恶性肿瘤不可缺少的重要标准之一。早年曾用过的荧光显微镜或APAAP方法基本被废弃。国际上公认的通用的方法是流式细胞术（FCM）。流式细胞术（FCM）白血病免疫分型是利用荧光素标记的单克隆抗体（McAb）作分子探针，多参数分析白血病细胞的细胞膜和细胞浆或细胞核的免疫表型，由此了解被测白血病细胞所属细胞系列及其分化程度。因为FCM能快速，多参数，客观的定性又定量测定细胞膜，浆，核的抗原表达。另一个重要理由是至今尚未发现白血病/淋巴瘤的特异抗原。所以能用正常血细胞的单抗来进行免疫分型是基于白血病形成的分化阻断学说即白血病细胞基因异常，分化受阻于某阶段形成不同

3、亚型的白血病。这群细胞充盈于骨髓。抗原表达与其相应系列/阶段的血细胞无明显差异。与形态学检查相似仅能根据数量的差异来判断病变细胞的属性。单参数免疫标志测定易将正常细胞包括在内。因此，近年来主张用设门（gating）方法。即用CD45与侧向角（sidescatter,SSC），对数取样后可将骨髓细胞清晰地分出淋巴细胞，单核细胞，成熟粒细胞，幼稚细胞和红细胞群，其理论依据是CD45是所有白细胞的抗原。其表达量在淋巴细胞最高，单核细胞，成熟粒细胞，早期造血细胞（blasts）依次减弱。红细胞（中，晚幼红细胞，成熟红细胞）不表达CD45。SSC反映细胞的颗粒性，成熟粒细胞SSC最高

4、，依次为单核细胞，淋巴细胞，blasts，红细胞。以CD45/SSC双参数，对数取样时即可把各细胞群区分出来。若同时加上一个，二个甚或三个荧光标记的单抗，则很容易识别非正常细胞群所表达的抗原。这样可以排除正常细胞的干扰。在幼稚细胞％低的情况下或检测残存白血病时尤为必要FCM分析白血病免疫表型时，测量细胞数量一般在10000～50000细胞之间，而且快速、特异、准确，重复性好，能区分细胞起源、划分其分化发育阶段等，对白血病的诊断与分型、治疗方案选择与预后判断、发病机理研究等有重要价值。一白细胞分化抗原白细胞分化抗原（leukocytedifferentiationantige

5、n，LDA）指血细胞在分化成熟为不同谱系（lineage）、分化的不同阶段及细胞活化过程中，出现或消失的细胞表面标记。它们大都为跨膜分子，由胞外区、跨膜区和胞浆区组成；有些以糖基磷脂酰肌醇（GPI）“锚”在细胞膜上；它们大都是蛋白或糖蛋白，少数为碳水化合物二CD的概念、CD分子的分类、功能及应用CD：用以单克隆抗体鉴定为主的聚类分析法，将来自不同实验室的单克隆抗体所识别的同一分化抗原归为一个分化群（Clusterofdifferentiation，CD）。并以此代替分化抗原以往的命名。在许多情况下，单克隆抗体及其识别的相应抗原都用同一个CD序号。迄今为止，人CD分子的序号已

6、从CD1命名至CD371，可大致划分为14个组。CD分子的功能：（1）免疫应答过程中参与免疫细胞的相互识别；免疫细胞识别抗原、活化、增殖和分化；免疫效应功能的发挥；（2）参与造血细胞的分化和造血过程的调控；（3）参与炎症的发生；（4）参与细胞的迁移如肿瘤细胞的转移等。CD分子的临床应用CD单克隆抗体可用于（1）阐明某些疾病的发病机制；（2）广泛应用于多种疾病的免疫诊断；（3）治疗移植排斥反应和肿瘤等疾病；CD20分子结构与分布：单链跨膜蛋白，仅表达于B细胞，早期即表达，分化为浆细胞后消失功能：（1）参与和调节B细胞信号转导、生长和分化。（2）直接参与调节跨膜Ca2+的流动。

7、三免疫分型常用的免疫标志及其意义白血病系列分化抗原T淋巴细胞白血病：CD3、CD5、CD7。B淋巴细胞白血病：CD10、CD19、CD22。NK淋巴细胞白血病：CD16、CD56、CD57。髓系白血病：CD13、CD14、CD33、MPO（髓过氧化物酶）。红白血病：GlyA（血型糖蛋白A）。巨核细胞白血病：CD41、CD42、CD61。白血病系列非特异性抗原CD34、HLA－DR为早期细胞抗原，无系列特异性，可与CD38联合运用于免疫分型。一般而言，干/祖细胞CD34＋、HLA－DR＋、CD38－，原始细胞CD34