非无菌产品微生物检查控制菌检查法ppt课件

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1、非无菌产品微生物检查：控制菌检查法概述控制菌检查法系用于在规定的试验条件下，检查供试品中是否存在特定的微生物。当本法用于检查非无菌制剂及其原、辅料是否符合相应的微生物标准时，应按规定进行检验，包括样品取样量和结果判断等。本检查法可采用替代的微生物检查法，包括自动检测方法，但必须证明替代方法等效于药典规定的检查方法。概述微生物限度检查法中的控制菌检查在药典一、二、三部附录中内容基本一致参照ICH协调案”非无菌药品微生物限度检查：控制菌检查”进行修订。主要修订内容控制菌检查项目、培养基体系、培养基适用性检查、检查方法适用性试验、结果判断等。供试液制备及实验环境要求-同《非无菌

2、产品微生物检查：微生物计数法》。-如果供试品具有抗菌活性，应尽可能去除或中和。-中和剂或灭活剂的使用使用了中和剂或灭活剂应确认有效性及对微生物的无毒性并应确认供试液与所使用的中和剂或灭活剂的相容性。控制菌检查法增修订内容收载方式检验项目替代法的应用原则结果判断方式修订前微生物限度检查修订后非无菌产品微生物检查：微生物计数法非无菌产品微生物检查：控制菌检查法非无菌药品微生物限度标准收载方式修订前大肠杆菌、大肠菌群、沙门菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌梭菌、白色念珠菌修订后大肠杆菌、耐胆盐革兰阴性菌、沙门菌、铜绿假单胞菌金黄色葡萄球菌、梭菌、白色念珠菌检验项目替代法的应用原则

3、本检查法可采用替代的微生物检查法，包括自动检测方法，但必须证明替代方法等效于药典规定的检查方法。修订前增菌、分离(纯化)、生化试验适宜的鉴定试验。修订后增菌、分离(纯化)、生化试验其它适宜方法进一步鉴定。收载方式及结果判断方式修订内容控制菌检查用培养基数量减少7个；在增菌过程，使用无选择性增菌培养基培养理由污染菌受到环境、加工过程及储存等影响，受到损伤，使用无选择性增菌培养基培养，使受损伤的细菌得到修复，提高检出率。培养基适用性试验培养基是绝大多数微生物试验的基础其质量是微生物试验成功关键因素。适宜的培养基制备方法、贮藏条件和质量控制试验是提供优质培养基的保证。培养基适用

4、性试验培养基的配制可按处方制备也可使用按处方生产的符合规定的商品化成品培养基，脱水培养基除附有处方和使用说明外还应注明有效期、贮存条件、适用性试验的质控菌株和用途。配制时应按使用说明上的要求操作，受潮结块不能使用，确保培养基的质量符合要求。培养基适用性试验再验证⒈如果其中有任一控制点发生变化,应重新进行培养基适用性检查。⒉当检验结果出现异常或实验室质量控制需要，也可通过培养基适用性检查提供一定依据。培养基适用性检查试验⒈固体培养基或原料变质不应使用；配制培养基储存过程中发现浑浊、变色、有菌生长、严重脱水等变化不应再使用。⒉不同处方培养基的替代使用不能通过培养基适用性试验确

5、定。⒊除特殊规定外，培养基配制采用蒸馏水或纯化水，但应进行检测控制，如蒸馏水pH值应为5～7。⒋尽量临用现配。培养基适用性检查配制培养基的保存⒈培养基灭菌后，不得在高压锅内过夜；⒉固体培养基灭菌或融化后，放置不得超过8h；⒊培养基于2～25℃保存，但不应超过21d；⒋固体琼脂培养基熔化再使用应不超过1次。培养基适用性检查菌种来源国内外认可的菌种保藏中心。试验用菌株的传代次数不得超过5代（从菌种保藏中心获得的干燥菌种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性金黄色葡萄球菌〔CMCC（B）26003〕铜绿假单胞菌〔CMCC（B）10104〕大肠埃

6、希菌〔CMCC（B）44102〕乙型副伤寒沙门菌〔CMCC（B）50094〕白色念珠菌〔CMCC（F）98001生孢梭菌〔CMCC（B）64941菌种及菌液制备菌液制备金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、沙门菌胰酪大豆胨肉汤或在胰酪大豆胨琼脂30～35℃，18～24h白色念珠菌沙氏葡萄糖琼脂或沙氏葡萄糖肉汤20℃～25℃，2～3天生孢梭菌梭菌增菌培养基30～35℃，置厌氧条件下培养24～48小时菌悬液的制备稀释剂pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液制成适宜浓度的菌悬液。菌悬液的贮存若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在2～8℃，可在24小时内使用。生孢梭菌孢子悬液

7、可替代新鲜的菌悬液，稳定的孢子悬液可保存在2～8℃，在验证过的贮存期内使用。菌液制备阴性对照试验确认试验条件是否符合要求。稀释剂代替供试品进行阴性对照试验，阴性对照试验应无菌生长。供试品检查时也需进行阴性对照试验。如果阴性对照有菌生长，应进行偏差调查。培养基适用性检查成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应进行培养基的适用性检查。促生长能力、抑制能力及指示特性的检查。菌株见表培养基适用性检查控制菌检查培养基特性试验菌株耐胆盐革兰阴性菌肠道菌增菌肉汤促生长能力大肠埃希菌铜绿假单胞菌抑制能力金黄色葡萄球菌紫红胆盐葡萄糖琼脂