DB3210∕T 1119-2022 蕙兰种苗组培生产技术规程(扬州市)

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1、ICS65.020.20CCSB053210扬州市地方标准DB3210/T1119—2022蕙兰种苗组培生产技术规程TechnicalregulationforthetissuecultureofCymbidiumfaberiseedlings2022-06-10发布2022-06-10实施扬州市市场监督管理局发布DB3210/T1119—2022前言本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布

2、机构不承担识别专利的责任。本文件由江苏里下河地区农业科学研究所提出。本文件由扬州市农业农村局归口。本文件起草单位：江苏里下河地区农业科学研究所。本文件主要起草人：孙叶、刘红、魏晓羽、刘春贵、马辉、张甜、袁媛、李风童、包建忠。IDB3210/T1119—2022蕙兰种苗组培生产技术规程1范围本文件规定了蕙兰种苗组培生产的培养基配制和灭菌、种苗组培、试管苗驯化、试管苗移栽、病虫害防治、出圃规格及生产记录要求。本文件适用于蕙兰种苗组培生产。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件

3、必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T8321.10农药合理使用准则（十）NY/T2306花卉种苗组培快繁技术规程3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4培养基配制和灭菌4.1培养基配制流程按培养基配方称取一定量MS培养基干粉、蔗糖、蛋白胨、激素和琼脂粉，加入一定量的蒸馏水加热至琼脂完全溶解后，用1mol/L的氯化氢或1mol/L的氢氧化钠溶液调节pH值至5.4～5.8，趁热把30ml～

4、50ml培养基分装于组培瓶中。4.2培养基配方种子播种配方：1/2MS+0.5mg/L（萘乙酸）+20g/L（蔗糖）+0.5g/L（蛋白胨）+0.5g/L（活性碳），pH值5.1～5.4。茎尖诱导配方：1/2MS+1.5mg/L（6-苄氨基腺嘌呤）+1.5mg/L（萘乙酸）+20g/L（蔗糖）+6g/L（琼脂），pH值5.1～5.4。增殖配方：1/2MS+0.5mg/L（萘乙酸）+蔗糖20g/L（蔗糖）+0.5g/L（蛋白胨）+0.5g/L（活性碳）+6g/L（琼脂），pH值5.1～5.4。诱芽配

5、方为：1/2MS+（1～3）mg/L（6-苄氨基腺嘌呤）+（0.5～1）mg/L（萘乙酸）+20g/L（蔗糖）+0.5g/L（蛋白胨）+6g/L（琼脂），pH值5.1～5.4。生根配方：1/2MS+（0.2～0.5）mg/L（萘乙酸）+20g/L（蔗糖）+0.5g/L（蛋白胨）+0.5g/L（活性碳）+6g/L（琼脂），pH值5.1～5.4。4.3高压灭菌1DB3210/T1119—2022在高压蒸汽灭菌器内压力0.12MPa，121℃灭菌30min。接种工具（包括镊子、手术刀、垫盘等）可随培养基

6、一起灭菌，灭菌后放置接种室，接种过程中采用酒精灯灼烧或高温灭菌器进行灭菌。5种苗组培5.1原球茎诱导培养5.1.1种子繁殖5.1.1.1蒴果采收与保存选择授粉后5个月～6个月、种皮微黄的蒴果采收备用，2个月内播种的蒴果保存于4℃低温冰箱，12个月内播种的蒴果保存于-20℃低温冰箱。5.1.1.2蒴果灭菌蒴果用75%酒精表面消毒后放置于无菌接种室超净工作台，放入0.1%的氯化汞溶液浸泡10min，取出晾干，浸入95%酒精3s，取出即刻在酒精灯上点燃，待蒴果表面酒精燃烧完，放置于无菌垫盘备用。5.1.

7、1.3种子无菌播种在超净工作台上用解剖刀切开朔果，取出种子，放入高温灭菌后的液体播种培养基，摇晃组培瓶使种子浸泡并分散于营养液中，一个蒴果无菌播种8瓶～10瓶。5.1.1.4种子萌发无菌播种后暗培养，室温23℃，3个月～12个月后种子开始萌发形成原球茎。5.1.2茎尖快繁5.1.2.1茎尖采集和消毒5月～6月，选取蕙兰优良品种生长健壮、无病虫害植株的2.0cm～3.0cm新生芽，用锋利刀片从母株的基部切取芽，用中性洗涤剂浸泡洗涤后，再用流水冲洗干净，剥去外层苞片。在超净工作台上用75%酒精消毒30

8、s，无菌水冲洗3次，后用0.1%的氯化汞溶液消毒5min，无菌水冲洗3次。5.1.2.2原球茎诱导在超净工作台上将已经消毒的新芽置于无菌接种盘上，剥去新生芽周围的所有叶片，用解剖刀剥取2mm～3mm茎尖接种于诱导培养基，室温23℃，光照强度1500lux，每天光照时间8h，2个月～3个月后诱导出原球茎。5.2继代培养原球茎转继代培养基，室温23℃，光照强度2000lux，每天光照时间10h，培养2个月～3个月后生长成为根状茎，根状茎在生长过程中，又形成多个突起，生成丛生型根状茎，再