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1、分子生物学综合实验红色荧光蛋白（RFP）的原核表达报告题目红色荧光蛋白（RFP）的原核表达作者姓名饶慧班级学号0802班/2008114010214指导教师王友如完成时间2011年02月生物学实验教学中心分子生物学综合实验目录引言11实验材料及实验仪器41.1实验材料41.2实验仪器52实验方法72.1重组质粒的构建72.2工程菌株的活化72.3诱导表达82.4SDS-PAGE检测表达蛋白83结果与分析9总结10参考文献11致谢13分子生物学综合实验红色荧光蛋白的原核表达饶慧（指导老师：王友如）（湖北师范学院生命科学学院生
2、物科学0802班湖北黄石435002）摘要实验目的：研究红色荧光蛋白（RedFluorescentProtein，RFP）基因在大肠杆菌中原核表达。实验方法：通过分别将DH-5ɑ(pDsRed-N1)和DH-5ɑ(pET-28ɑ)提取质粒、酶切并连接形成重组质粒pET-28a-RFP，将重组质粒通过转化的方法把含红色荧光蛋白（RFP）外源基因转入大肠杆菌体内进行表达，再用IPTG诱导RFP基因表达，可以看到显现红色，最后根据SDS-PAGE电泳结果，判断RFP基因在大肠杆菌中是否成功表达。实验结果：结果显示构建的重组质粒p
3、ET-28ɑ-RFP在E.coli中成功表达。关键词红色荧光蛋白；质粒重组；原核表达；诱导表达分子生物学综合实验ProkaryoteExpressionofRedFluorescentProtein(RFP)RaoHui(Class0802,CollegeofBiologyScience,HubeiNormalUniversity,Huangshi,Hubei,435002)AbstractObjective:TostudytheexpressionoftheRFPgeneintheE.coli.Methods:Extra
4、cttheplasmidoftheDH-5ɑ(pDsRed-N1)andDH-5ɑ(pET-28ɑ).ThenthetwoplasmidsarecutbyenzymeandareconnectedtoformpET-28a-RFPrecombinedplasmid.Guidingtherecombinedplasmid,whichcontainsexogenousgenesofRFP,intoE.coliforexpression,throughtransformativemethod.TheexpressionofRFP
5、genecanbeinducedbytheIPTGandthenwecanseered.Finally,judgingwhethertheRFPgenehasexpressedsuccessfullyinE.coliaccordingtotheresultsofSDS-PAGEelectrophoresis.Results:TheresultssuggestthatpET-28ɑ-RFPrecombinedplasmidhassuccessfullyexpressedinE.coli.KeywordsRedFluoresc
6、entProtein;RecombinedPlasmid;ProkaryoteExpression;InducedExpression分子生物学综合实验红色荧光蛋白的原核表达饶慧（指导老师：王友如）（湖北师范学院生命科学学院生物科学0802班湖北黄石435002）引言基因标记技术是近年来发展起来的分子生物学技术。荧光蛋白基因在标记基因方面由于具有独特的优点而引起了科学家的广泛关注，现已被普遍应用到分子生物学研究的各个方面。荧光蛋白在某种定义下可以说是革新了生物学研究——运用荧光蛋白可以观测到细胞的活动，可以标记表达蛋白，可
7、以进行深入的蛋白质组学实验等等。特别是在癌症研究的过程中，由于荧光蛋白的出现使得科学家们能够观测到肿瘤细胞的具体活动，比如肿瘤细胞的成长、入侵、转移和新生。 1999年，Matz等[2]从印度洋—太平洋地区的珊瑚虫中分离出6种与绿色荧光蛋白(greenfluorescentproteins,GFP)同源的荧光蛋白,并鉴定了它们的光谱性质。红色荧光蛋白(RedFluorecentProtein,RFP)基因是从海葵Discoso-masp中分离出的一种新的荧光蛋白基因,其蛋白质的最大吸收光谱为583nm，不需要任何预处理便可
8、检测到[3]。红色荧光蛋白因其红荧光较强的组织穿透力，已被广泛用于动物、植物和酵母等真核细胞内基因表达的报告基因，但作为原核细胞表达的报告基因还鲜有报道[4]。自1999年红色荧光被发现后,引起了科学家广泛的兴趣,人们对其理化性质和发光机制进行了深入的研究；通过对其修饰,人们得到了聚集程度低、成熟速率更
