家蚕BmPDCD2基因功能研究.pdf

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1、中国科技论文在线http://www.paper.edu.cn家蚕BmPDCD2基因功能研究#梁航华，马涵秀，胡晓松，崔红娟**（家蚕基因组生物学国家重点实验室，西南大学）5摘要：细胞程序性死亡PCD(programmedcelldeath)是一种正常的生命现象，与之相关的蛋白参与细胞增殖、分化、凋亡等多个过程。本研究通过定量PCR的方法检测了家蚕PDCD2基因BmPDCD2在各组织中的表达情况。利用双链RNA（double-strandRNA,dsRNA）干扰和过表达的手段在家蚕BmN4细胞中分别上

2、调和下调BmPDCD2，通过BrdU和TUNEL的10方法探究了其在家蚕BmN4细胞中的功能。结果表明BmPDCD2基因在各组织中均有表达，且参与了细胞增殖与凋亡的调控，为进一步研究该基因在家蚕变态发育中的作用奠定了基础。关键词：细胞生物学;家蚕;增殖;凋亡中图分类号：Q29115FunctionExplorationofBmPDCD2inBombyxmoriLiangHanghua,MaHanxiu,HuXiaosong,CuiHongjuan(StateKeyLaboratoryofSilkwor

3、mGenomeBiology(SouthwestUniversity))Abstract:Programmedcelldeath(PCD)isanormallifephenomenon,andtheassociatedproteinis20involvedincellproliferation,differentiation,apoptosisandotherprocesses.Inthisstudy,theexpressionofPDCD2geneinsilkwormwasdetectedbyqua

4、ntitativePCR.BmPDCD2wasup-regulatedanddown-regulatedinBmN4cellsbydouble-strandedRNAinterferenceandoverexpression.BrdUandTUNELassayswereusedtoexploreitsfunctioninsilkwormBmN4cells.TheresultsshowedthattheBmPDCD2wasexpressedinalltissues,anditwasinvolvedint

5、he25regulationofcellproliferationandapoptosis,whichlaidafoundationforthefurtherstudyoftheroleofthisgeneinthemetamorphosisofsilkworm.Keywords:cellbiology;Silkworm,Bombyxmori;cellproliferation;apoptosis300引言细胞程序性死亡(programmedcelldeath,PCD)是生物体发育过程中普遍存在的，是

6、一个由基因决定的细胞主动的有序的死亡方式，而最早发现的细胞程序性死亡蛋白则被命名为PDCD[1]。PCD作为细胞的一种基本生物学现象，它在生物体的进化、内环境的稳定以及多个系统的发育中发挥重要的作用[2]。作为模式昆虫，家蚕（Bombyxmori）拥有果蝇不可比35拟的优势，可以将其作为占70%农林害虫的鳞翅目模型进行研究，为害虫防治提供新的策略[3]。同时，作为完全变态昆虫，家蚕一生要经历多次旧组织解体和新器官形成等形态结构变化，是研究细胞增殖、分化、凋亡以及自噬的理想材料。本研究旨在对家蚕BmPD

7、CD2基因的功能进行初探，为进一步研究其在家蚕变态发育中的作用提供一定的参考。1材料与方法401.1材料实验所用家蚕品种为大造，由西南大学家蚕基因库提供。蚕卵在25℃相对湿度基金项目：高等学校博士学科点专项科研基金（20130182110003）作者简介：梁航华（1992-），男，博士研究生在读，研究方向：生物化学与分子生物学通信联系人：崔红娟（1968-），女，教授、博士生导师，主要研究方向;细胞生物学.E-mail:hongjuan.cui@gmail.com-1-中国科技论文在线http://w

8、ww.paper.edu.cn60%–80%下催青，孵化后幼虫在25℃下桑叶饲育。家蚕BmN4-SID1（以下简称BmN4）细胞由本实验室保存[4]，培养所用IPL-41昆虫细胞培养基购自Sigma公司，血清为Gibco公司产品。Trizol试剂和Tunel试剂盒购自Invitrogen公司。反转录试剂、T7体外转录试剂45盒以及SYBERGREEN预混液购自Promega公司。引物由北京六合华大基因科技股份有限公司合成。多聚甲醛为上海生工生物工程公司产