一起猪高致病性蓝耳病和_型圆环病毒病混合多重细菌感染的实验室诊断

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1、2014·11期·总第291期试验研究一起猪高致病性蓝耳病和II型圆环病毒病混合多重细菌感染的实验室诊断111123*吴云飞，黄邦伟，高寒松，胡雪梅，陈亮，朱玲（1.四川省广汉市畜牧食品局，四川广汉618300；2.四川省德阳市畜牧食品局，四川德阳618000；3.四川农业大学动物生物技术中心，四川雅安625014）中图分类号：S858.284.43文献标识码：B文章编号：1001-8964（2014）11-0033-03摘要：2014年4月，四川省某猪场出现高发病率和死亡率疫情，根据临床症状和流行病学特点无法确

2、诊病因。随后笔者无菌采集典型病死猪的脾脏、肝脏、肺脏、淋巴结、扁桃体、腹腔积液、胸腔积液等病料进行实验室诊断，最后确诊该猪场的发病原因为猪II型圆环病毒（PCV-2）、猪高致病性蓝耳病病毒、猪大肠杆菌、猪金黄色葡萄球菌和猪链球菌混合感染所致。关键词：猪高致病性蓝耳病病毒；猪圆环病毒II型（PCV-2）；实验室诊断；多重感染ALaboratoryDiagnosisofHPRRSVandPCV-2MixedMultipleBacterialInfectiononpigs123*WUYunfei，CHENLiang，Z

3、HULing，etal.（1.AnimalHusbandryandFoodBureauofGuanghanCity，SichuanGuanghan618300；2.AnimalHusbandryandFoodBureauofDeyangCity，SichuanDeyang618000；3.AnimalBiotechnologyCenterofSichuanAgriculturalUniversity，SichuanYa′an625014，China）Abstract：ApigfarminSichuanhadocc

4、urredahighincidenceandmortalityepidemicinApril2014，itwasverydifficulttodiagnosefromtheclinicalandepidemiologycharacteristics.Spleen，lung，lymphnodes，tonsils，seroperitoneumandpleuraleffusionsampleswerecollectedfromclassicsickpigsforexaminationinlaboratory.Atlas

5、t，thisepidemicwasdiagnosedasthemultipleinfectionofPCV-2，HPRRSV，E.coli，StaphylococcusandStreptococcus.Keywords：Highporcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus；Porcinecircovirus-2；Laboratorydiagnosis；Multipleinfection2014年4月，四川省某猪场出现疫情，发病猪只收稿日期：2014-08-25精神沉

6、郁，打堆，呼吸困难，咳嗽，食欲极差，腹泻，体作者简介：吴云飞（1986-），男，重庆垫江人，硕士研究生，预防兽医专业，主要从事动物疫病预防与控制工作。温40～41.5℃；眼眶周围呈青紫色、眼球突出、结膜潮E-mail：wyf198674@163.com红；腹股沟淋巴结水肿、紫红，乳头附近有皮下出血*通讯作者：朱玲（1972-)，女，教授，农学博士，主要从事点；怀孕母猪部分出现流产，病程较长的猪只严重消动物传染病和病原分子生物学研究。瘦、贫血；死后鼻腔流浑浊鼻液，关节肿胀。猪只的发332014·11期·总第291期

7、试验研究病率和死亡率高，根据流行病学调查和临床症状无保存备用；利用TRIZOL法提取RNA，RNA加入30μL法确诊病因。剖解病死猪后可见鼻、喉、气管和支气Free-RNaseH2O溶解，-20℃保存备用。管黏膜充血，表面有泡沫状黏液；气管内有泡沫；有1.2.1.3病毒PCR和RT-PCR反应的心包积液并有出血点；肺部病变不一，有的表现为（1）猪II型圆环病毒的PCR反应。PCR反应体肺炎、水肿和局部出血，有的出现肉变和坏死灶；有系：8μLddH2O，10μL2×PCRMix，上游、下游引物的肾脏表面有出血点，脾

8、脏边缘有梗死灶。无菌采集各0.5μL，1μLDNA模板；反应条件：94℃预变性4min，典型病死猪的脾脏、肝脏、肺脏、淋巴结、扁桃体、腹94℃30s、53℃30s、72℃45s进行30个循环，然后腔积液、胸腔积液等病料进行实验室诊断，以确定发72℃延伸10min，16℃保存。取10μL在1.0%琼脂糖病病原，现报告如下：凝胶中电泳，以MarkerDL1000作为参照并设立