换锦花lsmyb4基因的克隆与表达分析

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1、园艺学报2014，（4111）：2281–2390http://www.ahs.ac.cnActaHorticulturaeSinicaE-mail:yuanyixuebao@126.com换锦花LsMYB4基因的克隆与表达分析*许振渊，高燕会，周芬静，李国庆，熊艳，童再康（浙江农林大学亚热带森林培育国家重点实验室培育基地，浙江临安311300）摘要：以换锦花（Lycorissprengeri）为材料，采用RT-PCR方法和RACE技术相结合的方法，从花瓣中克隆了MYB基因的cDNA全长序列，命名为LsMYB4。该序列全长793bp，包含606bp

2、完整开放阅读框，编码201个氨基酸，具有明显的R2R3-MYB结构域，与中国水仙NtMYB相似性达96%。实时荧光定量PCR分析结果表明，LsMYB4在换锦花不同组织和不同花期均有表达，其中在花瓣中的相对表达量比叶中多9~10倍，在盛花期的相对表达量比花苞期多20倍。不同花色无性系花瓣中表达量存在差异，花色较浅的无性系高于其它无性系，推测LsMYB4在调控换锦花花色形成的过程中起着负调控作用。关键词：换锦花；MYB基因；克隆；表达分析中图分类号：S68文献标志码：A文章编号：0513-353X（2014）11-2281-10CloningandEx

3、pressionAnalysisofLsMYB4GeneinLycorissprengeri*XUZhen-yuan，GAOYan-hui，ZHOUFen-jing，LIGuo-qing，XIONGYan，andTONGZai-kang（TheNurturingStationfortheStateKeyLaboratoryofSubtropicalSilviculture，ZhejiangAgricultureandForestryUniversity，Lin’an，Zhejiang311300，China）Abstract：AMYBgenenam

4、edLsMYB4wasclonedbyRT-PCRandRACEmethodsfrompetalsofLycorissprengeri.Sequencesanalysisshowedthatthefull-lengthMYBcDNAwas793bpandcontainedaORFof606bpencoding201aminoacids.TheLsMYB4proteinhadaconservedR2R3-MYBdomainandtheaminoacidssequencesharedupto96%homelogieswithanthycyaninbio

5、synthesis-relatedR2R3-MYBtranscriptionfactorinNarcissustazetta.TheexpressionanalysisbyrealtimeqRT-PCRshowedthatLsMYB4wasexpressedindifferenttissuesandfloweringperiods.Theexpressionlevelinpetalwasalmosttentimeshigherthaninleaf.AndinflorescenceperiodtheexpressionofLsMYB4wastwent

6、ytimeshigherthaninearlybuddingperiod.TheLsMYB4expresseddiscrepantlyinfourclonesofL.sprengeri，andresultsofitimplicatedthatthelighterflowercolor，thehigherexpressionlevel.ThisshowedthatLsMYB4playedapossiblynegativeroleinanthocyaninbiosynthesisofLycorissprengeri.Keywords：Lycorissp

7、rengeri；MYB；cloning；expressionanalysis石蒜属（Lycoris）植物花形及花色丰富（秦卫华等，2003），又因为开放在少花的夏末秋初闷热时节，而被广泛应用于园林绿化等（刘志高等，2008；黄春红等，2013）。换锦花（Lycorissprengeri）为石蒜属植物的一种，其花为喇叭状，花色多为红色、紫红色（时剑等，2011），其中花被裂片顶收稿日期：2014–06–03；修回日期：2014–09–12基金项目：浙江省花卉新品种选育重大科技专项重点项目（2012C12909-14）*通信作者Authorforcor

8、respondence（E-mail：gaoyanhui408@126.com）2282园艺学报41卷端的蓝紫色非常少有，