种公鸭精液中大肠杆菌的分离鉴定与药敏试验

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1、试验研究种公鸭精液中大肠杆菌的分离鉴定与药敏试验林彬彬，林志敏（福建省莆田市农业科学研究所，莆田351144）摘要：本研究从莆田某蛋鸭养殖场无菌采集种公鸭精液进行细菌分离鉴定，并对其分离菌株进行了药敏试验和血清型鉴定。分离鉴定结果表明，分离鉴定了6株鸭大肠杆菌分离株；药敏试验结果表明，6株鸭大肠杆菌分离株对对22种抗生素的敏感程度存在一定的差异，而且存在着多重耐药性，对先锋V、头孢曲松、卡那霉素、壮观霉素、多粘菌素B等5种抗生素敏感；O血清型鉴定结果表明，6株鸭大肠杆菌分离株中4株属于O78血清型，2株属于O1血清型。关键词：种公鸭精液；大肠杆菌；药敏试验；血清型DOI:10

2、．3969/J.ISSN．1671-6027．2014．08.014家禽人工授精技术在20世纪30年代已开始研究，而我物公司生产；大肠杆菌O血清型鉴定用多因子血清、单因子国80年代中期才在蛋鸡中应用推广。近些年来，随着养鸭业血清，均为中国兽医药品监察所生产。的迅速发展，鸭的人工授精技术以其低投入高回报而越来越1.2方法多地受到重视，是近代种禽养殖中被广泛采用的技术措施之1.2.1分离培养无菌操作采集种公鸭精液，使用接种环分一。但在目前养殖中输精多是采用现采现输，如何确保获得别划线接种于普通营养琼脂、麦康凯琼脂平板上，置于37℃优质的精液以及避免精液中病原微生物的污染和疾病在公

3、温箱中培养24h后，在麦康凯琼脂平板上挑取单个典型菌落母鸭个体间的相互传播，已经成为困扰各养殖场的难题，相划线接种于伊红美蓝琼脂平板上，同样置于37℃温箱中培关文献对其的报道也少之又少。因此，本研究从莆田某蛋鸭养24h后备用。养殖场无菌采集种公鸭精液，进行细菌分离鉴定，并对其分1.2.2形态学鉴定从伊红美蓝琼脂平板上挑取单个典型离菌株进行了药敏试验和血清型鉴定，旨在确定种公鸭精液菌落涂片，火焰固定，自然干燥，采用常规革兰氏染色法对其中的主要病原菌及其对抗生素的敏感程度，以便能更好地推染色，然后在高倍油镜下观察。广鸭的人工授精技术，并对疾病的防治提供参考。1.2.3生化鉴定挑取

4、伊红美蓝琼脂平板上的单个典型菌1材料与方法落接种于营养肉汤中，置于37℃温箱中培养24h后，取少量1.1材料培养液于各种微量生化发酵管内，置于37℃温箱中培养1.1.1病料来源从莆田某蛋鸭养殖场无菌采集的种公鸭48h，进行生化鉴定。精液10份。1.2.4药敏试验用接种环挑取伊红美蓝琼脂平板上的单1.1.2主要试剂个典型菌落于5mL肉汤培养基中，置于37℃恒温箱中培养培养基：普通营养琼脂培养基、肉汤培养基、麦康凯琼脂24h后，使用细菌比浊管和灭菌生理盐水将菌液浓度调整到培养基、伊红美蓝培养基、三糖铁培养基，均为广东环凯微生0.5个麦氏单位（约1×108CFU），用灭菌棉签蘸取调

5、整后的物科技公司生产；染色液：革兰氏染色液，为南京建成科技有菌液，均匀地涂布在普通营养琼脂平板上，用无菌镊子贴上限公司生产；微量生化反应管：葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露药敏纸片，置于37℃温箱中培养24h，然后观察测量抑菌圈醇、蔗糖、靛基质、MR、VP、枸橼酸盐、硫化氢、尿素、硝酸盐还的大小并记录结果。原共12种，均为杭州天和微生物公司生产；药敏纸片：羧苄1.2.5O血清型鉴定首先用多因子鉴定血清，通过玻板凝青霉素（30μg/mL）、阿莫西林（10μg/mL）、先锋V集试验筛选出可能血清型，然后用单因子血清，通过玻板凝（30μg/mL）、头孢拉定（30μg/mL）、头孢曲松（3

6、0μg/mL）、链集试验筛选出血清型，最后通过试管凝集试验确定分离菌株霉素（10μg/mL）、庆大霉素（30μg/mL）、卡那霉素（30μg/mL）、的血清型。新霉素（30μg/mL）、大观霉素（100μg/mL）、红霉素2结果（15μg/mL）、四环素（30μg/mL）、强力霉素（30μg/mL）、多粘2.1分离培养结果在6个种公鸭精液样品中各分离得到菌素B（300μg/ml）、恩诺沙星（5μg/mL）、环丙沙星1株细菌，分别命名为J1、J2、J3、J4、J5、J6。6株分离菌株在普（5μg/mL）、氧氟沙星（5μg/mL）、诺氟沙星（10μg/mL）、左氟通营养琼脂平板上

7、均长成光滑圆润的乳白色菌落；在麦康凯沙星（5μg/mL）、复方新诺明（23.75/1.25μg/mL）、呋喃妥英琼脂平板上长成粉红色的圆形菌落；在伊红美蓝琼脂平板上（300μg/mL）、利福平（5μg/mL）共22种，均为杭州天和微生长成紫黑色带金属光泽的菌落。242014年第08期畜畜牧兽医科技信息牧兽医科技信息试验研究2.2镜检结果6株分离菌株经革兰氏染色法后，镜检均可对恩诺沙星、环丙沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、左氟沙星敏感，观察到红色的革兰氏阴性短杆菌，成对或散在排列。J6对左氟沙星中敏。2.3生化