龙山卷丹百合无症病毒的检测

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1、天津农业科学TianjinAgriculturalSciences2014，20（5）：27-30植物生理与生物技术龙山卷丹百合无症病毒的检测蒋辉，源朝政，陈海霞(湖南农业大学园艺园林学院，湖南长沙410128)摘要：以龙山卷丹百合的病叶作为试材，采用DAS-ELISAS检测法对样品进行百合无症病毒的检测，检出率为58.3%；提取总RNA为模板，通过RT-PCR扩增其外壳蛋白基因，大小为287bp，和预期条带大小一致。经Blast比对发现，该基因片段与Genbank上发表的LSVCP基因序列同源性达92%以上。关键词：卷丹百合；RT-PC

2、R；DAS-ELISA；百合无症病毒中图分类号：S682.2文献标识码：ADOI编码：10.3969/j.issn.1006－6500.2014.05.006DetectionofLSVInfectingLongshanLiliumtigrinumJIANGHui,YUANChao-zheng,CHENHai-xia（CollegeofHorticultureandLandscape,HunanAgricultureUniversity,Changsha,Hunan410128，China）Abstrat:Inthisresearch,L

3、iliumtigrinumoflongshanwasusedasexperimentalmaterialtobestudiedforvirusdetection.There-sultofDAS-ELISASshowedthatthepositiverateofLSVwas58.3%.TotalRNAusedastemplate,thecoatproteingenebyRT-PCRamplificationsizewas287bp,thesameasexpected.BytheBlast,thehomologyofthisgenefragm

4、entandtheLSVCPgenesequencethatpublishedinGenbankwasmorethan92%.Keywords:Liliumtigrinum;RT–PCR;DAS–ELISA;LSV卷丹百合是湖南省一种具有浓郁地方特色的触或昆虫媒介的方式传播。由于单独侵染百合时农产品，不仅具备食用和药用双重价值，还有较强常使寄主表现为隐症，故称为百合无症病毒；与其的观赏价值，主要分布于湘西州龙山县、邵阳市隆它病毒复合侵染时，会出现脉明、畸形、坏死斑等[6-9]回县和永州市东安县，其中以龙山县栽培历史最症状。近年来，国内外对

5、侵染百合的LSV有[10-13]为久远，在省内外享有很高的知名度，食用百合生较多的研究报道，但关于湖南龙山卷丹百合产已经成为当地农户致富的特色创收项目之一。感染LSV的报道尚少。本研究通过对湖南龙山卷但长期以来，由于百合种球生产主要靠扦插和分丹百合实地调查，采回病样，采用血清学和RT-球等无性繁殖方式进行，病毒感染严重，导致产量PCR法对卷丹百合感染LSV的情况进行检测和和质量下降，产区出现百合植株的黄化、皱缩和畸鉴定，旨在为湖南龙山卷丹百合病毒检测、病毒病形等衰退现象，给食用百合产业带来巨大的经济的防治和无毒苗的培育提供技术支撑。损失，

6、严重影响农户的生产积极性。到目前为止，已相继报道对百合具有侵染性1材料和方法的病毒达10种以上，其中危害较为严重的有3种：百合无症病毒（LSV）、黄瓜花叶病毒、郁金香1.1DAS-ELISA检测法[1-4]碎锦病毒。百合无症病毒属于线性病毒科、香1.1.1材料石竹潜隐病毒属，是分布范围最广、危害最大的病卷丹百合样品于2012年7月采自湖南省湘西[5]毒之一，主要通过汁液传播，也可以通过叶片接州龙山县百合产区，田间感病株呈现出叶脉黄化，收稿日期：2014-02-19；修订日期：2014-03-10基金项目：湖南省科技厅项目（2013NK30

7、43）；湖南省自然基金（11JJ6022）作者简介：蒋辉（1972—），男，湖南怀化人，实验师，主要从事园艺植物栽培生理研究。·28·天津农业科学第20卷[15]部分叶片卷曲，植株矮缩束顶的不正常生长现象。乙锭（EB）染色后，进行电泳检测。阳性对照（含LSV病毒样品）和阴性对照（不含1.2.4cDNA第一链的合成提取卷丹百合病LSV病毒样品）均购自上海卡奴生物科技有限公叶的RNA，按照天根公司cDNA第一链合成试剂司的LSVDAS-ELISA检测试剂盒。盒说明书操作步骤合成cDNA。在20μL反应体1.1.2方法称取0.5g新鲜百合病叶置

8、于研钵系中：①5×gDNABuffer2μL，TotalRNA6μL，中，加入液氮充分研磨，并转移到装有200μL裂ddH2O2μL，混匀，42℃孵育3min；②向①混合解液的1.5mL离心管