转bt基因海岛棉分子检测及抗虫性鉴定

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1、转Bt基因海岛棉分子检测及抗虫性鉴定贾莉莉范李萍李娟陈全家张海燕王希东曲延新疆农业大学海岛棉作为新疆特有的资源，其优良的纤维品质和商业价值都是其他作物不可替代的，因此选育抗性优良的海岛棉新品系（品种）显得尤为重要。以海岛棉K222、新海25、新海30为受体，利用农杆菌介导技术导入0的基因Bt,通过PCR检测、Southern杂交、Bt-CrylAb/lAc试纸条检测、抗虫性签定等，随后又对转Bt基因海岛棉品系的纤维品质进行考察，发现A的基因Bt的导入对9个海岛棉品系的纤维品质有不同程度的影响。PCR检测结果表明，9个转Bt基因品系都含有目的基因，并

2、且阳性率都在90%以上；由Southern杂交结果可看出，7个转Bt基因品系出现了杂交条带，其中3个品系为单拷3个品系为双拷W,1个品系为三拷贝。用Bt-CrylAb/lAc免疫试纸条检测转Bt基因品系及对照，发现转Bt基因品系的试纸条上出现2条紫红色条带，而对照的试纸条上只出现1条紫红色条带，K2-ZKC66的阳性率达到90%。抗虫性鉴定结果表明，转Bt基因品系的叶片受危害较轻，叶片较为完整，对照叶片受危害较重，叶片不完整，7个转Bt基因抗虫棉品系校正死亡率都在60%以上。与对照相比，部分转Bt基因海岛棉品系上半部平均长度和长度整齐度显著降低，断

3、裂比强度极显著降低，断裂伸长率极显著增加，短纤维率显著增加，成熟度极显著降低，马克隆值极显著增加。结果显示，7个转Bt基因品系的目的基因已成功整合到海岛棉基因组中。与对照相比，转基因品系纤维品质差异显著。关键词：转基因技术;海岛棉;Bt基因;抗虫性;纤维品质;生物育种;贾莉莉（1991一），女，新疆阿克苏人，研允生，主要从事棉花分子育种研宄。E-mail:595851794@qq.com。曲延英，，教授，生导师，主要从事棉花遗传育种研究。E-mail:xjyyq5322@126.com。:2016-06-06基金：国家转基因重大专项（编号:2014

4、ZX08005-005-009）Received：2016-06-06转基因是一项新技术，转基因技术是一项新的产业。自1983年世界上第一例转棊因植物烟草问世以来U1，对转棊因作物的抗虫、抗除草剂、抗病及品质改良方面的研究与应用取得了巨大进展［2-4］。1996—2014年，全球转基因作物的种植面积从170万hm增至1.815亿hm,增加了100多倍，转基因农作物成为全球推广种植最为迅速的作物，这也使转基因技术成为近代史上发展最快的作物改良技术。美国是全球转基因作物种植的第一大国，种植的转基因作物包括玉米、大豆、棉花、油菜、甜菜、紫苜蓿、木瓜和南瓜

5、等，其屮棉花、大豆和玉米种植面积较广。我国是世界上率先研究农业生物育种的国家之一，转基因育种的面积也一直位居世界前列，棉花是我W主要的经济作物，在我WM民经济发展中具有举足轻重的地位边1。近年来，随着基因工程技术的不断发展，利用生物技术创新棉花种质资源和培育新品种是一条非常有效的途径，极人地推动了棉花遗传育种的发展m。我国转棊因抗虫棉作为生物育种创新成功的典范在国际上产生了深远的影响，将Bt基因转入到棉花中后，可以使棉花表达杀虫蛋白，从而能杀死目标害虫进而可以减少杀虫剂的使用XZil，抗虫棉的种植与推广在一定程度上降低了棉铃虫对棉花产量的影响，给棉

6、花产业带来了巨大的经济效益。随着转Bt基因抗虫棉的长期种植，陆地棉抗虫性得到了很大提高但是新疆特有的海岛棉转棊因抗虫性研宄却相对落后，至今仍未有转棊因抗虫海岛棉品系的报道。本试验利用前期通过农杆菌介异获得的转基因海岛棉品系（品种）开展PCR检测及Southern杂交等室内分子检测，以及大田Bt-CrylAb/lAc试纸条检测与室内抗虫性鉴定等，分析目的基因Bt转入受体及表达的情况，为培育新疆地区抗虫优良的海岛棉品种（品系）提供理论依据。1材料与方法1.1试验材料本试验材料是由新疆农业大学生物技术重点实验室前期采用农杆菌介导法将外源基因Bt导入海岛棉

7、K222、新海25和新海30，经过多代系统选育得到的高代转基因材料［14-15］。0的基因Bt是由郭三堆研究员惠赠，现由新疆农业人学生物技术重点实验室保存，Bt棊因植物表达载体是由新疆农业大学生物技术重点实验室构建的。本试验所用的品种（品系）为海岛棉K222（对照）及其转Bt基因的7个品系（K2-ZKC31、K2-ZKC37、K2-ZKC53、K2-ZKC58、K2-ZKC65、K2-ZKC66、K2-ZKC70）,新海25（对照）及其转Bt基因的XH25-ZKC和新海30（对照）及其转Bt基因的X1130-ZKC。1.2试验方法1.2.1PCR检

8、测及Southern杂交实验室内种植待检测样品，苗期取样，采用十六烷基三中基溴化铵法（cetyltrimethylammo