探究越鞠丸中不同工艺的栀子醇提物对小鼠的抗抑郁作用

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1、探究越鞠丸中不同工艺的栀子醇提物对小鼠的抗抑郁作用越鞠丸为金元医家朱震亨创立的治疗郁证的代表方剂，最早出现于《丹溪心法卷三六郁五十二》中，全方由栀子、苍术、香附、川芎、神曲组成，开创了中医专方防治郁证之先河。栀子见于神农本经，为茜草科植物山栀的果实，性苦寒，无毒。入心、肝、肺、胃经。栀子的化学成分较为复杂，达100多种。栀子从汉代延续至今，记载的炮制方法约有14种之多，但临床上常用的为生栀子、炒栀子、焦栀子，中国药典1995年版中收载的栀子加工炮制品也为上述3种。前期试验研究结果显示，越鞠丸中栀子具有较强的抗抑郁作用。本文采用2

2、种行为绝望小鼠模型，对不同工艺的栀子进行了抗抑郁活性研究，为其活性部位筛选提供实验基础。　　1资料与方法　　1.1实验动物　　健康昆明种小鼠，48只，体质量25～30g，全雄，由上海实验研究所提供。编号scxy-(上海实验研究所)-2012-004。　　1.2实验药物　　生栀子、炒栀子、焦栀子(南京轩德堂提供生栀子、炒栀子、焦栀子，批号130702)。不同工艺的栀子(生、炒、焦)各取100g，放入药物打磨机打碎，置入1L烧杯中，加95%乙醇到1L，放磁力搅拌机上浸泡12h后静置1h后取上层清液，此过程相同方法重复3次。将3次取得

3、的上层清液过滤后放入旋转蒸发皿蒸发至200mL后放入56℃的烘箱中烘3h，保存备用。　　1.3实验试剂和仪器　　乙醇为国产分析纯(纯度>99.7%，批号为20130709);SHZ-Ⅲ循环水式真空泵(南京科尔仪器设备有限公司);旋转蒸发器RE-52A(上海亚荣生化仪器厂);通用隔离箱(上海吉量软件科技有限公司)。　　1.4方法　　健康昆明种小鼠48只，放置动物房(25±2)℃，适应环境7d，自由进食饮水，自然光照，普通饲料喂养，然后按体质量随机分为4组，即CTL组、生栀子组、炒栀子组、焦栀子组，每组12只。　

4、　采用慢性不可预知的温和性应激模型(CUMS)进行造模，CUMS抑郁模型的制作包括以下几种不同的应激因子:昼夜节律的调整和光照性质的改变(彻夜光照)、食物饮水的调整、环境的改变(鼠笼倾斜、潮湿垫料、束缚、异物)、游泳。将几种不同的应激因子在实验全程中应用，使动物不能预料刺激的发生。具体安排如下:第1天，禁食、禁水，均持续24h;第2天，空瓶、外来物体，分别持续1h及24h;第3天，强迫游泳、彻夜光照，分别持续6min、12h;第4天，束缚、斜笼(45°)，分别持续2h及7h;第5天，禁食、湿笼，均持续24h;第6天，禁水

5、、彻夜光照，分别持续24h及12h;第7天，空瓶、斜笼，分别持续1h及7h。　　造模28d后，CTL组、生栀子组、炒栀子组、焦栀子给予组分别按体质量的1%给予9%生理盐水、4g/kg的生栀子醇提物、炒栀子醇提物、焦栀子醇提物灌胃。　　2结果　　2.1小鼠悬尾实验(TST)　　参照Steru方法略有改动，将单个小鼠尾端(距尾2cm处)用胶布粘在悬挂钩上面，放入通用隔音箱内，使其成倒挂状态，头部离箱底20cm。小鼠为了克服不正常体位而挣扎活动，但活动一段时间出现间断性不动，显示失望状态。　　观察6min，记录后4min内小鼠不动时间

6、为失望时间。生理盐水作为阳性对照药，与生理盐水对照组比较，生栀子、炒栀子组均有趋势，其中焦栀子组具有显著性差异(P<0.05)。　　2.2小鼠强迫游泳实验(FST)　　参照Porsolt方法略有改动。将单个小鼠放入水深5L烧杯中，水温(25±2)℃，观察6min，记录后4min小鼠游泳的不动时间。不动指小鼠在水中停止挣扎，即显漂浮状态，仅有微小的肢体运动以保持头部浮在水面。实验完将小鼠放回笼内。生理盐水作为阳性对照药，与生理盐水对照组比较，生栀子、炒栀子组均有趋势，其中焦栀子组具有显著性差异(P<0.0

7、5)。　　3讨论　　由于抑郁症是一个包括了身体与心理异常的疾病，因此对抑郁症的动物模型争议非常大，所以抑郁模型的进一步研究显得尤为迫切。到目前为止，已有20多种方法可以用作抑郁症动物模型的制备，可从生物学、遗传学、社会心理学等各角度来模拟抑郁症的表现。分为应激模型、神经生化功能改变模型、转基因动物模型、孤养或分养模型等。慢性不可预知的温和性应激模型(CUMS)主要模拟了人类抑郁的核心症状即快感的缺乏，同时模拟了其他重性抑郁障碍的症状表现，如运动能力及社会交往能力下降、侵犯攻击能力缺陷、探索行为能力下降、性行为能力下降等。CUMS

8、抑郁模型记录动物模型的抑郁并广泛用于了解抑郁症的病理生理机制。因为它有一个优势遗传模型在密切模仿人类抑郁症。此外，CUMS抑郁模型具有良好的效果，其潜在的三种类型相结合的有效准则如表面效度、结构效度和预测效度，符合抑郁症的动物模型的要求。CUMS抑郁模型具有高度