kdr为靶的sirna抑制乳腺癌细胞增殖的体内外研究

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1、KDR为靶的siRNA抑制乳腺癌细胞增殖的体内外研究：张晓静,葛银林*,侯琳,李泉【摘要】　　目的:采用化学修饰的小干扰RNA(siRNA)在体内外抑制含激酶插入区受体(KDR)基因表达,探讨化学修饰的siRNA介导的RNA干扰（RNAi）技术在乳腺癌基因治疗的可行性和特异性。方法:采用阳离子脂质体Lipofectamine2000TM作为转染试剂将针对人KDR基因的siRNA转染人类乳腺细胞株MCF7,诱导RNAi,采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法,RTPCR,为转染试剂将siRNA直接注射进裸鼠移植瘤,监测肿瘤生长变化,RTPCR,免

2、疫组化方法等监测KDR基因和蛋白表达变化。结果:靶向KDR基因siRNA转染MCF7后,细胞增殖被抑制,KDRmRNA和蛋白的表达明显降低;裸鼠体内实验显示siRNA治疗组瘤组织的增长受到明显抑制;RTPCR,免疫组化结果同时表明治疗组KDR表达下调。各对照组指标无明显变化。结论:化学修饰的siRNA介导的RNAi在体内外均能成功抑制靶基因的表达和MCF7细胞增殖,是潜在的肿瘤治疗新方法,而KDR亦可作为肿瘤治疗的新靶点。【关键词】RNA干扰siRNAMCF7细胞血管内皮生长因子受体2基因治疗　　[Abstract]AIM:Toinhi

3、bitkinaseinsertdomaincontainingreceptor(KDR)expressionchemicallymodifiedsiRNAinvitroandinvivoandtoinvestigatethefeasibilityandspecificityofgenetherapyforbreastcancer.METHODS:Invitro,siRNAeLipofectamine2000TM.ThechangesofKDRmRNAandproteinexpressioninbothsiRNAtreatmentgroupa

4、ndcontrolgroupeasuredbyMTTassayandRTPCR,Invivo,thesiRNAorinnudemicebyusingcationicpolymernanoparticleInvivojetPEITM.TumorgroRNAandproteinexpressionofKDReasuredbyRTPCRandimmunohistochemicalstaining.RESULTS:ExperimentsinvitroshoRNAexpression.Invivo,thegroorore,RTPCRandimmu

5、nohistochemicalresultsindicatedthatKDRmRNAandproteinexpressionors.CONCLUSION:RNAimediatedbychemicallymodifiedsiRNAmarkedlydecreasedKDRgeneexpressionandinhibitedcellularproliferation.Itmayhavethepotentialasatherapeuticmethodtotreathumancancer.　　[Keyaincontainingreceptor,KDR

6、),即血管内皮生长因子受体2（vascularendothelialgroRNA降解的一种细胞反应过程。siRNA(smallinterferenceRNA,siRNA)是RNAi的效应分子。我们依据RNAi原理,设计合成以KDR为靶的siRNA,并对其进行化学修饰,增强其在体内外的稳定性,并以人类乳腺癌细胞株MCF7为研究对象,在体外细胞水平及裸鼠动物水平,探讨siRNA对KDR基因特异性沉默及对细胞和瘤体增殖的抑制作用。　　1材料和方法　　1.1材料乳腺癌MCF7细胞株购自中国协和基础学院细胞中心,常规培养于含100mL/L胎牛血清的

7、高糖DMEM(Gibco公司产品)培养液中,50mL/LCO2、37℃饱和湿度的孵箱中培养传代。BALB/cnu/nu裸小鼠（雌性,4周龄,体质量12～14g）,购自上海斯莱克动物有限公司,按规定饲养于无菌动物试验室,经高压灭菌的标准饲料和水供动物自由饮食。LipofectamineTM2000及TRIzol为Invitrogen公司产品;InvivojetPEITM为PolyPlus公司产品;AMV逆转录试剂盒购自Promega公司;鼠抗flk1多克隆抗体（sc6251）为santacruz公司产品;免疫组化检测试剂盒PV6002购自北

8、京中杉公司;ECL发光试剂购自北京普利莱公司。　　1.2方法　　1.2.1siRNA设计合成从美国国立生物技术信息中心NCBI数据库中获取人KDRmRNA的序列全长