复方通络胶囊对人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用

《复方通络胶囊对人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、复方通络胶囊对人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用【关键词】复方通络胶囊;内皮细胞;缺氧-复氧;保护作用　　ToobservetheprotectiveeffectofFufangtongluocapsuleonhumanumbilicalveinendothelialcells(HUVECs)injurycausedbyhypoxia-reoxygenation.MethodsHUVECsodel，thenorphologybyinvertedmicroscope，anddeterminatedcellviabilitybyMTT，anddetectedlacta

2、tedehydrogenase(LDH)levelincellculturemedium.ResultsFufangtongluocapsulecansignificantlyinhibitcellmorphologychangeandendothelialcellinjurycausedbyhypoxia-reoxygenationandeffectivelyreduceLDHrelease(P<0.05，P<0.01).ConclusionFufangtongluocapsulehasobviouslyprotectiveeffectonhum

3、anumbilicalveinendothelialcellsinjury.　　[Keyl，南京市中医院提供;丹参注射液，正大青春宝药业有限公司，批号：0502181;RPMI1640培养基，Gibco产品;完全DMEM培养基，Gibco产品;二甲基亚砜　　(DMSO)，上海凌峰化学试剂有限公司;新生牛血清，杭州四季青生物工程材料有限公司，批号：051120;胰蛋白酶(1∶250)，Amresco分装;乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒，南京建成生物工程研究所，批号：20050304;连二亚硫酸钠(Na2S2O4)，上海化学试剂采购站经销，批号90878;MTT[溴化

4、-(4，5-二甲-2-噻唑基)-2，5-二苯基四氮唑]，Amresco分装。　　1.2仪器CK40倒置显微镜，OLYMPUS，JAPAN;超净工作台，苏州净化设备厂;DG3022A型酶联免疫检测仪，华东电子管厂产品;752分光光度计，上海光谱仪器有限公司。　　1.3实验细胞HUVECs细胞，购于中科院上海细胞库。　　1.4方法　　1.4.1HUVECs的培养及氧化损伤模型的建立HUVECs按常规方法复苏后接种于40ml培养瓶中，培养液为含10%新生牛血清的RPMI1640培养液，37℃、95%O2、5%CO2条件下培养，待细胞长满瓶底后，倒掉培养液，用PBS轻

5、轻荡洗两次，加入0.25%胰蛋白酶37℃消化2～3min，用新生牛血清终止消化，吸管轻轻吹打数次，使细胞完全分散，倒置显微镜下观察，计数，将细胞浓度调整为1×108个/L的细胞悬液，接种于细胞培养板上(96孔、24孔)同样条件下继续培养，待细胞长满单层融合后，弃去上清，以含0.5%血清的培养液培养24h，使其同步化生长。HUVECs同步化生长后，换用无血清的1640培养液，除正常对照组外加入终浓度为1mmol/L的Na2S2O420μl作用2h，吸去培养液，用D-Hank’s液洗两次，然后加入无血清的DMEM200μl，继续培养24h。　　1.4.2MTT比色

6、法检测细胞存活力96孔板每孔加入MTT溶液(5mg/ml)20μl，37℃继续培养4h。吸去上清液终止培养后，每孔加入150μlDMSO，振荡5min，在酶联免疫检测仪上，570nm波长处测定各孔吸光度(OD值)。并根据下列公式计算药物对缺氧引起的内皮细胞损伤的抑制率：　　抑制率=(OD给药组-OD模型组)/(OD对照组-OD模型组)×100%　　1.4.3LDH活性测定各组HUVECs经缺氧处理后，收集培养液，参照南京建成生物工程公司LDH检测试剂盒说明检测。　　1.5实验分组(1)正常对照组：加入无血清的1640培养液3ml，正常条件下培养32h。(2)模

7、型组：加入无血清的1640培养液3ml，缺氧24h，复氧8h;各给药组预先加入不同浓度的药物预孵1h，然后按模型组处理。(3)丹参注射液组：丹参注射液(终浓度为3.0g/L)，复氧8h。(4)复方通络胶囊组：复方通络胶囊终浓度为1×10-4g/L，复氧8h。(5)复方通络胶囊Ⅱ组：复方通络胶囊终浓度为1×10-5g/L，复氧8h;(6)复方通络胶囊Ⅲ组：复方通络胶囊终浓度为1×10-6g/L，复氧8h。　　1.6统计学处理数据以均数±标准差(〖x〗±s)表示，结果进行组间比较，采用t检验。　　2.2对HUVECs细胞存活率的影响模型组细胞经缺氧-复氧处理后，O

8、D570值明显降低，复方通络胶囊中、高