梗阻性黄疸大鼠肝脏损害及血清毒性物质变化

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1、梗阻性黄疸大鼠肝脏损害及血清毒性物质变化：韩德兰苑建斌王永清闫秀玲【摘要】目的:探讨梗阻性黄疸(梗黄)大鼠肝脏损害及其血清毒性物质的变化。方法:采用胆总管结扎方法建立梗阻性黄疸大鼠模型，将36只大鼠随机分为假手术(sham)组6只、梗阻性黄疸(CBDL)组30只(CBDL组又分为1周、2周、3周、4周、5周亚组,每组6只)。监测各组血液TNFα、内毒素、肝功能变化。结果：CBDL组均可见肝细胞坏死及增生，汇管区可见胆管扩张、胆汁淤积，肝组织改变随梗阻时间的延长而逐渐加重，血清内毒素及TNFα含量与梗阻时间明显相关。结论：CBDL大鼠肝脏形态改变明显，血ALT、TBIL、内毒素

2、、TNFα含量明显升高，并与梗黄时间有关。【关键词】大鼠;黄疸/阻塞性;肝脏;肿瘤坏死因子　　【ABSTRACT】Objective:Tostudytheliverdamageandtoxicityindexvariationinserumforobstructivejaundicerats.Methods:Choledochligationmethododel,odelsgroupice，andCBDLgroup30，30modelsinCBDLgroupeofOJ.Conclusion:Microscopeexaminationshoagedalongeextension，

3、bute.　　【KEY)中起关键作用[1]。本研究通过观察OJ大鼠模型2周肝脏形态学改变、不同时间肝功能指标及内毒素、TNFα浓度变化，以期发现其变化规律，为临床研究和治疗提供可靠依据。　　1材料与方法　　1.1实验动物按照GB1492294《实验动物微生物和寄生虫检测等级》的标准，选用同一实验室清洁级成年健康雄性SpragueDapus公司CHK2FGS显微镜;日本Hitach公司80P7超速低温离心机;德国315组织切片机;北京普尔伟业生物科技公司TNFα放免试剂盒;北京安度斯生物技术公司的鲎试剂盒等。　　1.3方法　　1.3.1实验动物模型的建立对大鼠采用胆

4、总管结扎的方法建立梗阻性黄疸大鼠模型(CBDL组)[3]。具体操作方法如下：采用10%水合氯醛按3mg/kg腹腔注射麻醉大鼠。在无菌条件下行腹腔正中线切口，切口长约2cm，至剑突下，暴露十二指肠上段胆总管，近肝门处分离肝门静脉与胆总管，剥离胆总管周围组织。用3/0号丝线双重结扎胆总管，与两道结扎线之间切断胆总管，分层关腹。假手术组(sham组)动物游离胆总管步骤与前相同，但只置线不结扎。整个操作均在无菌条件下进行，然后饲以正常饮水及复合饲料喂养。模型建立组分别于结扎后1、2、3、4、5周麻醉动物取材(每个取材时间点6只)，假手术组6只与5周模型组同批麻醉取材。　　1.3.2取材以

5、10%水合氯醛(3mL/kg)腹腔内注射麻醉大鼠，切开皮肤暴露腹腔，心脏取血，留取血液。血标本静置1h后，以3000r/min低温离心15min，取血清-20℃冻存，用于TNFα、ETX、肝功能检测。留取肝组织，采用HE染色确定模型建立情况，Masson三色染色观察肝硬化形成情况，石蜡包埋的肝组织以4μm的厚度连续切片，按以下步骤进行Masson三色染色：二甲苯脱蜡—梯度酒精至水-0.5%苏木素7min—1%盐酸酒精分化4s—酸性丽春红品红15min—1%磷鉬酸10s—2%苯胺蓝2min—0.2%冰醋酸1min梯度酒精至水—二甲苯透明—中性树胶封片。　　1.3.3血清肝功能检

6、测从-20℃冰箱中取出血清样本，于37℃水浴箱中水浴10min，采用全自动血清生化分析仪，由生化室协助测定血清总胆红素(TBIL)和丙氨酸氨基转移酶(ALT)值。　　1.3.4血清TNFα的测定取血清样本严格按照大鼠放射免疫试剂盒说明书要求检测细胞因子TNFα水平。　　1.3.5ETX测定在一定条件下，极微量的ETX能把终点法鲎试剂(TAL)中的凝固酶原激活为凝固酶，凝固酶能迅速催化人工合成的显色底物分裂出显色基团pNA(对硝基苯胺)，游离的pNA在溶液中呈黄色，可用分光光度计在405～410mm处测定溶液的吸光度值A。　　1.4统计学处理采用SPSS12.0软件包，数据均用

7、均数±准差(x±s)表示，进行方差检验，P<0.05为差异有显著性。　　图1假手术组(HE×100)图2假手术组(Masson×400)图3模型建立组(HE×100)图4模型建立组(Masson×400)2.3血清各指标检测结果　　2.3.1肝功能变化血清ALT在CBDL术后造模组1周即明显增加，与Sham组比较有明显差异(P<0.05)，之后逐渐下降，但均明显高于Sham组。血清TBIL趋势与ALT相同。　　2.3.2ETX及TNFα变化ETX检测结果：CBDL术