大黄、虫对药含药血清对原代培养人子宫肌瘤细胞增殖

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1、大黄、虫对药含药血清对原代培养人子宫肌瘤细胞增殖【摘要】目的观察大黄虫对药不同剂量含药血清对原代培养人子宫肌瘤细胞增殖的影响。方法原代培养并建立人子宫平滑肌瘤细胞系，采用中药血清药理学方法处理细胞，以MTT比色法检测含药血清作用于子宫肌瘤细胞12，24，48，72h的光密度值，计算细胞存活率。结果大黄虫对药含药血清可直接抑制子宫肌瘤细胞增殖。结论大黄虫对药含药血清可直接抑制子宫肌瘤细胞增殖，子宫肌瘤细胞是大黄虫对药含药血清发挥治疗作用的靶细胞。【关键词】大黄;虫;子宫肌瘤;细胞培养;含药血清　Abstract：Objective

2、ToobservetheeffectsofdifferentdosagesofmedicatedseraofDahuangandZhechongontheproliferationofhumanleiomyomacellsinvitro.MethodsHumanleiomyomacellspharmacologymethod.TheMTTassaycontainingDahuangandZhechongshoyomacells.ConclusionDahuangandZhechongmedicatedserumhasinhibi

3、toryeffectonproliferationofhysteromyomacells,yomacellsaretargetcells.　　Keyyoma;Cellculture;Medicatedserum　　子宫肌瘤(myomaofuterus)又称子宫平滑肌瘤(leiomyomaofuterus)，是女性生殖器官中最常见的良性肿瘤，也是人体最常见的肿瘤之一，它好发于生育年龄的妇女，素有“妇科第一瘤”之称。根据其临床表现，属中医“癥瘕”范畴，即妇女下腹包块，伴有或痛或胀或满或阴道出血溢液等症状的病证。由于淤血内阻在疾病中的

4、关键作用，活血化淤方药得到普遍推崇，应用和研究最多并最早确认疗效的是桂枝茯苓丸。随着研究的不断深入，我们发现，在改善血淤证患者体内血液黏、凝、浓、聚状态、消散肌瘤方面，破血消癥类中药制剂的效果明显优于活血化淤类中药制剂。大黄、虫对药组合出自经方下淤血汤、大黄虫丸等，具有活血化淤，消散癥积之功用。两药相须为用，大黄入血偏于泻，虫入血偏于通，使脉络畅通，淤血得散[1]。本实验采用细胞生物学与中药血清药理学相结合的方法，研究大黄、虫含药血清对原代培养的人子宫肌瘤细胞的生长抑制作用，探讨经方对药的作用机制。　　1材料　　1.1动物及含药

5、血清的制备清洁级健康雌性SD大鼠20只，鼠龄80～100d，体质量180～220g。购自第四军医大学实验动物中心，用于制备含药血清。分5组，每组4只，空白组(无药血清组)，桂枝茯苓胶囊组(含有桂枝茯苓胶囊的含药血清组)，大黄虫对药小剂量组，大黄虫对药中剂量组，大黄虫对药大剂量组。灌胃给药，2次/d，共3d，末次给药前8h禁食不禁水。桂枝茯苓胶囊以临床日用量的10倍给药。大黄虫对药小、中、大剂量组以临床日用量的1，2，4倍给药。末次给药后1h股动脉采血，分离血清，经56℃恒温水浴30min处理灭活补体后，用0.22μm的微孔滤膜过

6、滤除菌分装，置-20℃冻存备用。　　1.2药物及试剂大黄虫对药，购自陕西中医学院金秋门诊，经本院药剂科鉴定无伪劣品。药物加水浸泡常规煎煮过滤，水浴蒸发至大、中、小剂量，每毫升含生药量分别为0.506g，0.253g，0.126g，置于4℃冰箱保存备用。桂枝茯苓胶囊，连云港康缘制药有限责任公司，0.31g/粒。国药准字号210950005，产品批号060518。胰蛋白酶、DMEM培养基、新生胎牛血清、抗α-平滑肌肌动蛋白(α-Actin)、MTT、SP免疫组化试剂盒均购自第四军医大学宝泰克生物试剂有限公司。青霉素、链霉素、碳酸氢钠

7、、二甲基亚砜(DMSO)、氯化钠、氯化钾、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、苯甲酸雌二醇、黄体酮均为第四军医大学实验动物中心309细胞培养室友情提供。　　1.3仪器电动玻璃匀浆机(宁波新芝科器研究所，DY-1)，电子天平(上海精科天平，Ja12002)，低温高速离心机(Heraeusinstruments，Biofugefresco)，低温高速台式离心机(Heraeusinstruments，Biofugestratos)，超净工作台(汇龙仪表电子责任有限公司，SHJ系列)，电热恒温水槽(精宏实验设备有限公司，DK-600型)，可调式封闭

8、电炉(上海浦东荣丰科学仪器有限公司)，台式离心机(Heraeusinstruments，BIOFUGEPICO)，移液枪(GILSON，200μl、10μl、1000μl)，NAPCO-5410型CO2培养箱、OLYMPUS倒置显微镜、MR5000型酶标仪。一次