人骨髓间充质干细胞体外支持脐血cd34+细胞增殖的研究

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1、人骨髓间充质干细胞体外支持脐血CD34+细胞增殖的研究作者：马俐君，高磊，周虹，邱慧颖，胡晓霞，解琳娜，王健民【摘要】为了研究人骨髓间充质干细胞（MSC）作为滋养层细胞体外支持脐血CD34+细胞扩增的作用，将MSC和胎儿骨髓来源的成纤维细胞样骨髓基质细胞系（HFCL）经60Coγ线照射后分别制备细胞滋养层，比较不同滋养层细胞和添加或不加细胞因子对脐血CD34+细胞增殖数及LTC-IC数的影响。结果表明，无论有无添加细胞因子(rhFL、rhSCF、rhTPO)，HFCL滋养层组培养12天扩增细胞数明显高于MSC滋养层组，以第0天细胞数为10

2、0%（下同），有细胞因子组为(9797±361）%vs(7061±418）%，无细胞因子组为(5305±354)%vs(1992±247)%，均P<0.01。MSC滋养层组CD34+细胞扩增数与HFCL滋养层组相比无显著差异［（825±305）%vs(820±191)%，P>0.05］，但在细胞因子存在时低于HFCL滋养层组［（939±212）%vs(1617±222)%，P<0.01］。MSC滋养层组维持脐血中LTC-IC的能力明显优于HFCL滋养层组［第5周CFU-GM数（129.95±8.73）个/105接种细胞数

3、vs（89.81±10.29）个/105接种细胞数，P<0.05］；细胞因子存在时，其作用更为明显［第5周CFU-GM数（192.93±4.95）个/105接种细胞数vs（90.47±14.28）个/105接种细胞数，P<0.01］。MSC与HFCL按一定比例混合，可提高扩增效率。当MSC与HFCL之比为4∶1时，集落形成数量最高，达（186.89±11.11）个/105接种细胞数，明显高于比例为3∶2（131.45±13.02）个/105接种细胞数和二者单用组［前者（138.92±14.84）个/105接种细胞数，后者（64

4、.63±6.11）个/105接种细胞数；均P<0.01］。结论:MSC维持脐血中LTC-IC集落形成的能力优于基质细胞系HFCL，HFCL支持脐血CD34+细胞的增殖能力优于MSC，MSC加上适量HFCL可显著提高CD34+细胞扩增效率。【关键词】间充质干细胞；脐血CD34＋细胞；CD34+细胞扩增　　EffectsofHumanMesenchymalStemCellsandFibroblastoidCellLineasFeederLayersonExpansionofUmbilicalCordBloodCD34+CellsInVi

5、tro　　AbstractToinvestigatetheeffectsofhumanmesenchymalstemcells(MSC)andhumanfibroblastoidcellline(HFCL)asfeederlayeronexpansionofumbilicalcordbloodCD34+cellsinvitro,60Coγ-rayirradiatedMSCandHFCLatterbersatday0aintainingtheLTC-ICofUCBCD34+cells,i.e.thenumberofCFU-GMcolonie

6、sinthefifthoreobvious,i.e.thenumberofCFU-GMcoloniesinthefifthixedaintainingtheLTC-ICofUCBCD34+cells.coloniesaintainingtheexpansionofCD34+cellsandcytokinescanenhancethiseffect，aintainingtheLTC-ICofUCBCD34+cellsinvitro.MSCesenchymalstemcell；cordbloodCD34+cell；CD34+cellexpan

7、sion　　体内的稳态造血依赖于复杂而完整的骨髓造血微环境，人骨髓间充质干细胞（mesenchymalstemcell,MSC）是成纤维细胞、血管内皮细胞、巨噬细胞、脂肪细胞等多种骨髓造血微环境的重要组成细胞的前体细胞，在造血调控中起着关键的作用。有实验和临床研究证实，MSC与造血干/祖细胞（HSPC）共移植可促进移植后造血重建，然而具体机理目前尚无定论。明确MSC体外支持造血的作用对于进一步研究MSC在造血干细胞移植中的作用及提高MSC的效率具有重要意义。为此我们进行了从体外到动物体内的系列研究。本研究报道在建立了成人骨髓MSC的大规模

8、分离培养方法的基础上，通过比较MSC与早前建立的有明确体外支持造血作用的骨髓成纤维细胞样基质细胞系(humanfibroblastoidcellline,HFCL)作为滋养层细胞体外支持脐血C